[发明专利]一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法

说明书

本发明提供了一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)对幽门螺杆菌突变菌进行培养，所述幽门螺杆菌突变菌的保藏编号为CCTCCNO：M2020028；(2)粗提幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡；(3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。本发明本发明针对幽门螺杆菌突变菌可以很好的获得其具有疫苗活性的外膜囊泡，提取率比已有技术高出40％以上。

技术领域

本发明涉及疫苗制备技术，具体涉及一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法。

背景技术

幽门螺杆菌(H.pylori，简称Hp)是一种微需氧的革兰氏阴性细菌，能够在人的胃及十二指肠等区域终身持续存在，它会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，严重者甚至导致胃及十二指肠溃疡与胃癌。幽门螺杆菌感染是人中最常见的细菌感染性疾病，全球有一半以上人口感染有幽门螺杆菌。这种感染与许多胃疾病，例如慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃癌或胃部癌症和黏膜相关性淋巴样组织(mucosaassociatedlymphoidtissue，MALT)淋巴瘤相关。

在此前的研究中，CN111849850A获得了一种可以刺激免疫反应的幽门螺杆菌突变菌，该突变菌具有制备相应疫苗的潜力。但如何更好的获得相应的疫苗还没有进行深入的研究。

发明内容

针对上述现有技术不足，本发明的目的在于提供一种一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法，该制备方法可以很好的获得幽门螺杆菌突变菌的外膜囊泡。

针对上述目的，本发明提供的方案如下：

一种幽门螺杆菌突变菌疫苗的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

(1)对幽门螺杆菌突变菌进行培养，所述幽门螺杆菌突变菌的保藏编号为CCTCCNO：M2020028；

(2)粗提幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡；

(3)加入Optiprep梯度离心液进行离心，对步骤(2)所得突变菌外膜囊泡进行纯化。

作为本发明的一个优选方案，步骤(1)中，培养所述幽门螺杆菌突变菌时，采用的培养基为液体布氏肉汤培养基，培养温度为37℃。

优选的，步骤(2)中，进行粗提时，采用的方法为：对培养得到的菌液进行浓缩，然后进行超速离心，所得沉淀物为粗提的幽门螺杆菌突变菌外膜囊泡。

优选的，进行离心时，温度为4℃，离心力为150000g，离心时间为2h。

优选的，步骤(3)中，Optiprep梯度离心液的浓度为35～40％，温度为4℃，离心力为120000g，离心时间为10h。

本发明的有益效果：

本发明针对已有菌株(保藏编号CCTCCNO：M2020028)幽门螺杆菌突变菌，可以很好的获得其具有疫苗活性的外膜囊泡，提取率比已有技术高出40％以上。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

本发明中的幽门螺杆菌突变菌，是已有菌株，本发明不涉及该菌株的制备，该菌株的保藏编号为CCTCCNO：M2020028。

实施例1

(1)利用液体布氏肉汤培养基对幽门螺杆菌突变菌(CCTCCNO：M2020028)进行培养，培养温度为37℃，培养至OD值为1。