[发明专利]一种外泌体分离纯化方法在审
| 申请号： | 202111000462.X | 申请日： | 2021-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN113444682A | 公开（公告）日： | 2021-09-28 |
| 发明（设计）人： | 葛啸虎;王淼;陆路;杜焕青;韩春乐 | 申请（专利权）人： | 天九再生医学（天津）科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 天津诺德知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 12213 | 代理人： | 栾志超;王旭 |
| 地址： | 300301 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 外泌体 分离 纯化 方法 | ||
1.一种外泌体分离纯化方法，其特征在于：取含有外泌体的体液或培养液，3000g-8000g离心，去除沉淀蛋白后进行深层过滤，再流穿阴离子交换层析和/或分子筛层析后获得纯化后的外泌体溶液。
2.根据权利要求1所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：进行阴离子交换层析和/或分子筛层析前预先进行超滤。
3.根据权利要求1所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：所述阴离子交换层析填料的配基为强阴离子交换配基或弱阴离子交换配基。
4.根据权利要求3所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：阴离子交换配基为季铵基、二乙氨基乙基、二乙氨基丙基中的一种或几种的组合，填料粒径范围为15-300μm，孔径范围为20-150nm。
5.根据权利要求1-4中任一所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：含有外泌体的体液为乳源样品时，预先对样品进行杂质去除处理；
杂质去除处理为酸沉淀、凝乳酶处理和盐析处理中的一种或多种的组合。
6.根据权利要求5所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：所述杂质去除处理为去除杂质蛋白和/或脂肪球，其中杂质蛋白为酪蛋白及其他等电点为pH4.0-5.5的杂蛋白。
7.根据权利要求5所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：具体步骤如下：
对乳源样品进行杂质去除处理，去除杂质后得到外泌体粗提液；
将外泌体粗提液通过超滤膜包或中空纤维柱进行超滤浓缩换液；
对浓缩后的外泌体粗提液进行阴离子交换层析，获得的流穿液为外泌体溶液；
将外泌体溶液通过超滤膜包或中空纤维柱进行超滤浓缩换液；
对浓缩后的外泌体溶液进行分子筛层析，取外水峰范围流穿液即为纯化后的外泌体溶液。
8.根据权利要求7所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：先进行阴离子交换层析再进行分子筛层析；
或者，先进行分子筛层析，再进行阴离子交换层析。
9.根据权利要求7所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：通过离心后取上清和/或过滤器除蛋白的方法去除沉淀蛋白。
10.根据权利要求6-9中任一所述的外泌体分离纯化方法，其特征在于：乳源样品为生乳样品、脱脂乳样品或巴氏消毒乳样品。
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