[发明专利]一种重组人源胶原蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组人源胶原蛋白及其制备方法和应用，属于生物工程领域，该制备方法包括如下步骤：(1)获得重组载体：选取人类三型胶原保守区域肽段，将该序列重复8次进行人工全基因合成RHIIIC8，将其构建到pET22b的表达载体中获得重组载体；(2)构建重组基因工程菌：提取质粒、将其转化到BL21‑DE3‑PLySs感受态细胞中，挑取单克隆并对其扩大培养，获得重组基因工程菌；(3)制备重组人源胶原蛋白：经过诱导表达目的蛋白，然后对表达产物进行分离纯化，得到高纯度的可溶于水的重组人源胶原蛋白。本发明提供的重组人源胶原蛋白具有活性高的特点，可以广泛应用于生物医药和化妆品行业。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种重组人源胶原蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

胶原蛋白是人体最丰富的蛋白质之一，胶原蛋白水解物具有显著生物活性，如抗氧化特性、抗高血压活性、降脂活性以及修复受损皮肤的性质。由于胶原蛋白在皮肤中具有双重作用：提供弹性蛋白和胶原蛋白形成的构建模块，充当配体或结合成纤维细胞受体刺激合成分泌透明质酸；因此广泛应用于护肤品之中。胶原蛋白是右旋三螺旋结构，由重复氨基酸三联体序列组成：甘氨酸-X-Y，其中X通常是脯氨酸，Y通常是羟脯氨酸。在多肽链的每第三个位置存在小氨基酸甘氨酸允许沿着胶原分子中心轴紧密堆积三螺旋。非螺旋状，球状区域存在于胶原蛋白分子的任何一端，在用适当的蛋白酶切割之前防止原纤维形成。导致其作为支架材料受欢迎的特性包括其相对低的毒性，基质金属蛋白酶的自然降解，易于交联和功能化以及物种之间存在的氨基酸序列的同源性。

动物提取胶原蛋白在生物材料领域普遍应用于药物输送和组织工程。从皮肤伤口愈合，到骨支架，到胶原蛋白水凝胶，由于它们的注射性质和原位自组装，也被用于了包括心肌、椎间椎间盘、真皮替代物和再生软骨，但在临床应用中还有许多问题存在。主要障碍是所用胶原的来源，来源于动物或人体的胶原蛋白主要缺点是可能传播疾病，过敏反应，病原体污染。此外，还存在批次之间的差异以及文化原因增加了对动物来源胶原的使用限制。因此，在制备人源胶原蛋白的技术领域，亟需开发一种纯度高、安全性高、亲水性强、生物相容性好的人源胶原蛋白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组人源胶原蛋白及其制备方法和应用。

本发明的技术方案是：一种重组人源胶原蛋白，该重组人源胶原蛋白的编码基因RHIIIC8，RHIIIC8的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；RHIIIC8的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

一种含有编码基因RHIIIC8的表达载体。

一种含有编码基因RHIIIC8的基因工程菌。

一种重组人源胶原蛋白的制备方法，方法包括如下步骤：

(1)获得重组载体：选取人类三型胶原保守区域肽段：

GERGGPGGPGPQGPPGKNGETGPQGPPGPT，将该序列重复8次进行人工全基因合成RHIIIC8，将其构建到pET22b的表达载体中获得重组载体；

(2)构建重组基因工程菌：提取质粒、将其转化到BL21-DE3-PLySs感受态细胞中，挑取单克隆并对其扩大培养，获得重组基因工程菌；

(3)制备重组人源胶原蛋白：经过诱导表达目的蛋白，然后对表达产物进行分离纯化，得到高纯度的可溶于水的重组人源胶原蛋白。

进一步的技术方案，步骤(3)中分离纯化的具体步骤如下：

(3.1)将步骤(2)中的工程菌接种至LB培养基中，37℃培养过夜，按照体积比1:100转接LB培养基，在摇瓶中37℃培养至OD600为0.6，加入终浓度为0.1mM的IPTG，25℃培养6-8小时，离心力为5000xg离心5分钟，收集菌体沉淀；