[发明专利]一种香蕉胚挽救的方法

说明书

本发明提供一种香蕉胚挽救的方法，包括授粉、外植体处理和胚挽救培养三个步骤，选用授粉后第35～45天的香蕉果实进行胚挽救培养，该时期种子胚的胚活力较高，且种子内部填充物呈冻状，能够有效降低操作过程的污染，提高胚挽救成苗率，再采用乙烯利处理香蕉果实，在不影响胚活力的情况下，使种子能够与果肉完全分离，降低胚挽救培养的污染率；采用添加了IAA、6‑BA和DA‑6的MS培养基进行避光培养，可减少胚褐化率，提高胚挽救成苗率；本发明的方法，具有操作简单、授粉率高、胚挽救成苗率高、污染率低等特点，解决了香蕉种子育种中萌发率低、污染率高等的问题，对香蕉杂交育种技术具有重要意义。

技术领域

本发明涉及植物育种技术领域，特别涉及一种香蕉胚挽救的方法。

背景技术

胚挽救是指对由于营养或生理原因造成的难以播种成苗或在发育早期阶段就败育、退化的胚进行早期分离培养成苗的过程。该技术在培养早熟品种、无核品种、克服远缘杂交、培育三倍体及其它多倍体新种质等方面有着广泛的应用，如专利CN109479704A《一种早熟蟠桃胚挽救的方法》、专利CN101564011A《一种欧亚种无核葡萄高效育种方法》、专利CN112470920A《一种通过幼胚挽救技术获得茉莉花种间杂交后代的方法》和专利CN111264386A《一种通过杂交和胚挽救相结合创造水稻三倍体的方法》。胚挽救技术的应用不仅克服了胚败育问题，还缩短了育种周期，在植物育种中发挥了重要作用。

香蕉由于遗传背景和倍性复杂，自然情况下种子生成量少、且萌发率极低，严重影响杂交育种技术在香蕉育种方面的应用。由于香蕉是典型的呼吸跃变型水果，需在成熟前摘取果实，但香蕉未成熟果实的果肉为坚硬的淀粉，难以将果肉和种子完全分离，导致种子表面灭菌不彻底，污染率高。目前香蕉种子发育过程的研究比较少，关于香蕉的胚挽救成苗技术也较少见报。

本文以常见的两个香蕉现代栽培种的两个重要祖先种和常见的二倍体香蕉野生型为材料，对香蕉胚胎挽救技术进行细致的探索。

发明内容

鉴以此，本发明提出一种香蕉胚挽救的方法，解决香蕉种子育种的萌发率低、污染率高的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种香蕉胚挽救的方法，包括以下步骤：

S1.授粉：收集香蕉雄花花蜜，进行人工授粉；

S2.外植体处理：取授粉后第35～45d的香蕉果实，用乙烯利处理香蕉果实后，剥取种子，灭菌；

S3.胚挽救培养：去除种子表面附着的水后，剥取种子胚，将种子胚接种到胚胎挽救培养基中，避光培养3～4周，诱导成苗；所述胚挽救培养基为MS+IAA 0.1～0.3mg/L+6-BA1～3mg/L+DA-6 0.14～0.18mg/L，pH为5.5～6。

优选的，所述香蕉为基因型AA的野生香蕉、基因型BB的野生香蕉、如前所述两种野生香蕉的亚种间杂交种和种间杂交种中的一种。

优选的，所述收集香蕉雄花花蜜的方法为于每天上午，在香蕉雄花花梳展开后，用移液器吸取雄花花萼基部分泌的蜜腺，在无菌环境下，将收集到的花蜜过0.22μm孔径的细菌过滤器，向过滤后的花蜜加入碘盐，保存备用，用该方法获取的香蕉雄花花蜜进行授粉，可提高授粉率。

优选的，所述碘盐的加入量为每100g花蜜加入1～2g碘盐。

优选的，步骤S2中，所述香蕉果实为授粉后第40d的香蕉果实。