[发明专利]一种生物催化2-(苯基羰基)乙腈制备手性扁桃酸的方法

权利要求书

1.一种生产手性扁桃酸的方法，其特征在于，以2-(苯基羰基)乙腈为底物，经酶催化体系催化获得R-扁桃酸或S-扁桃酸；所述酶催化体系由腈水解酶、扁桃酸脱氢酶和辅酶再生系统组成。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶催化体系中的腈水解酶来源于Apibacter sp.ESL0404，NCBI登录号为WP_220264820，或Alcaligenesfaecalis，NCBI登录号为MK888683.1。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扁桃酸脱氢酶未来源于Lactobacillusbrevis的R-扁桃酸脱氢酶(NCBI登录号：NC_008497.1)，或来源于Pseudomonas putida的S-扁桃酸脱氢酶(NCBI登录号：AAC15503.1)。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辅酶再生系统为：以亚磷酸脱氢酶为辅酶再生酶、以亚磷酸为辅酶再生底物、包含NAD(P)H和NAD(P)⁺的亚磷酸脱氢酶辅酶再生系统；或者，以醇脱氢酶为辅酶再生酶、以异丙醇为辅酶再生底物、包含NAD(P)H和NAD(P)⁺的醇脱氢酶辅酶再生系统；又或者，以甲酸脱氢酶为辅酶再生酶、以甲酸为辅酶再生底物、包含NAD(P)H和NAD(P)⁺的甲酸脱氢酶辅酶再生系统。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述亚磷酸脱氢酶来源于Pseudomonasstutzeri(NCBI登录号WP_063540370.1)；所述醇脱氢酶基因来源于Bacillusstearothermophilus(NCBI登录号NZ_JYNW01000069.1)；所属甲酸脱氢酶来源于Candidaboidinii(NCBI登录号CAB54834.1)。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，催化体系中，以酶活力为单位，所述腈水解酶、扁桃酸脱氢酶和辅酶再生酶的添加量为20～10000U/L；作为优选，添加量为100～1000U/L。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，催化体系中，底物2-(苯基羰基)乙腈的添加量为10～1000mM；辅酶再生底物的添加量为15～1500mM。辅酶NAD⁺添加量为0.01～10mM。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，作为优选，反应温度为30～50℃；反应的pH值为6～9，采用氢氧化钠、亚磷酸或甲酸来控制pH。