[发明专利]抗猪蓝耳病的分子标记及其检测试剂盒研发与应用

说明书

本发明提供了抗猪蓝耳病(PRRS)相关的SNP分子标记，属于分子遗传学领域，具体涉及猪EFL1基因第12内含子和DBNL基因第9内含子变异位点的分子标记检测方法及其在抗猪蓝耳病育种中的应用。所述抗猪蓝耳病相关SNP标记的核苷酸序列如序列表SEQ IDNO.1～NO.2所示。本发明提供了用于检测抗猪蓝耳病相关分子标记检测试剂盒，即扩增EFL1和DBNL基因SNPs的检测试剂盒。本发明提供的分子标记不受猪年龄、性别以及环境所限制，可在仔猪出生后检测筛选抗病个体，实施早期选择和抗病育种。

技术领域

本发明属于分子遗传学领域，具体涉及一种筛选抗猪蓝耳病猪的育种方法，通过判断猪EFL1基因第12内含子和DBNL基因第9内含子突变位点的多态性进行早期选择，并应用该突变位点实现蓝耳病抗病育种。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)俗称“蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种以各年龄段猪呼吸障碍、母猪繁殖障碍和仔猪高死亡率为主要特征的高度传染性疾病，对全球生猪养殖业造成巨大损失。目前，我国PRRS防控主要依赖于疫苗，然而当前PRRSV商业灭活疫苗大多是基于单个PRRSV病毒株，对具有高度变异的PRRSV感染并没有很好的保护效力，而弱毒苗还会带来疫苗毒株感染、毒力返强等潜在威胁。因此，从遗传水平增强宿主对PRRS的抗病力，选育抗PRRS的优良品种，对于防控PRRSV大规模流行提供了一个研究途径，为解决PRRS防控难题带来了新希望。

病毒载量是病毒感染后宿主与病毒相互斗争进而影响疾病进程的指标。感染PRRSV早期会对宿主产生免疫抑制，从而促进病毒大量繁殖，感染后期机体免疫应答与病毒的博弈决定着机体抗病性和个体存活能力，而抗病个体的免疫系统将抑制病毒增殖并使病毒载量逐渐降低，甚至完全被清除。发明人课题组前期发现通城猪与大白猪相比表现出较强的抗病力，通过人工感染PRRSV后发现两品种在临床症状、细胞因子水平、血常规指标、血清中的病毒载量等性状中存在较大差异，病毒血症最高值约为大白猪最高值的2/5(Liang等，Differences of immune responses between Tongcheng(Chinese local breed)andLarge White pigs after artificial infection with highly pathogenic porcinereproductive and respiratory syndrome virus.Virus Res.2016 Apr 2；215:84-93.)。据此，发明人课题组以大白猪×通城猪高代横交群体为研究对象，通过PRRSV人工感染，以感染后第14天个体存活情况划分易感组和抗病组，结果表明抗病组的病毒载量在第4、7、11天均显著低于易感组(P0.05)(高国丽等，HP-PRRSV人工感染后猪血清病毒载量和体重增长的变化规律[J].华中农业大学学报,2020,39(05):56-61.)。血液病毒载量高低能够反映不同个体对PRRS抗病和易感程度，但其必须在病毒感染后才能检测，如果能通过检测免疫相关性状的分子标记就可在疾病发生前筛选抗病个体，实施抗PRRS的早期选择和抗病育种。因此本发明通过将SNP位点与猪感染PRRSV后不同时间点病毒载量性状进行关联分析，以期为猪抗病育种提供有效的分子标记。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明通过筛选猪抗PRRS的分子标记，并建立相应的检测方法，为PRRS抗病育种提供有效的分子遗传标记和技术方法。