[发明专利]一种对肿瘤组织CD47表达水平进行实时评估的标志物及其应用

说明书

本发明属于肿瘤免疫疗法评估领域，具体涉及一种对肿瘤组织CD47表达水平进行实时评估的标志物及其应用。本发明基于体外实验研究发现ZEB1是调控宫颈癌细胞CD47表达的重要转录因子，并首次发现ZEB1在缺氧宫颈癌细胞中的外泌体中富集；进一步在宫颈癌临床样本中验证患者血浆外泌体ZEB1的表达量和肿瘤组织CD47的表达量呈正相关，通过对宫颈癌患者血浆外泌体ZEB1的表达水平进行检测，能够反映出宫颈癌组织中CD47表达量的高低，这对于宫颈癌CD47免疫疗法评估具有重要的指导意义。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫疗法评估领域，涉及一种对肿瘤组织CD47表达水平进行实时评估的标志物及其应用。

背景技术

随着天然免疫检查点的深入研究，肿瘤免疫学领域迎来了治疗癌症的新时代，抑制性免疫检查点阻滞便是抗癌治疗中最重要的进展之一。CD47作为新型的免疫检查点分子，在免疫应答和肿瘤免疫逃逸中扮演着重要角色。CD47通过与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(SIRPα)结合，启动“别吃我”抑制性信号，从而使肿瘤细胞躲避巨噬细胞的吞噬，并影响特异性杀瘤性T细胞活化，介导肿瘤进展。CD47-SIRPα轴免疫阻滞剂是近十年来肿瘤免疫学最有希望的新靶点之一，但这一免疫疗法并不适用于所有人，如何有效地筛选出CD47高表达的肿瘤患者并使其在该免疫疗法中获益显得尤为重要。目前检测CD47的方式主要是免疫组化法，但是存在以下问题：1.采用“免疫组化法”直观检测肿瘤组织中CD47蛋白表达，但不能实现实时检测；2.免疫组化抗体多样性，评估层次不均一。因此，如何高效实时准确地判断肿瘤组织CD47表达量对患者免疫疗法的评估至关重要。

液态活检是指以非侵入方式从体液中获得生物标记物并对其分析，从而反映其来源组织的相关信息的检测技术。随着社会的进步和医学技术的不断发展，对于恶性肿瘤精准诊治的要求不断提高。随着对肿瘤分子机制逐渐深入地研究，使得液态活检所涉及的研究内容从传统的肿瘤循环细胞(CTC)和肿瘤循环DNA(ctDNA)发展至肿瘤细胞来源的外泌体。

肿瘤细胞来源的外泌体(Exosome)富含肿瘤细胞特征性物质，尤其是蛋白，并普遍存在于患者体液中，其能够将这些遗传信息或肿瘤信号通路转移至肿瘤微环境中，促进肿瘤进展，在应用于肿瘤的早期筛查和临床诊断中有显著优势。因此，寻找源于肿瘤组织且能够反映CD47表达量的外泌体，实现实时准确判断肿瘤组织中CD47的表达量，对于宫颈癌的免疫疗法评估具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明旨在提供一种对肿瘤组织CD47表达水平进行实时评估的标志物及其应用。本申请筛选出与肿瘤组织CD47的表达水平密切相关的源于宫颈癌细胞的血浆外泌体蛋白，通过对血浆外泌体蛋白的表达水平进行实时检测，从而实时反映肿瘤组织中CD47的表达水平，有助于对宫颈癌患者是否适于CD47免疫疗法进行实时评估。

第一方面，本发明提供一种对肿瘤组织CD47的表达水平进行实时评估的标志物，该标志物为血浆外泌体ZEB1，该血浆外泌体ZEB1源于肿瘤细胞。

进一步地，血浆外泌体ZEB1的表达水平与肿瘤组织CD47的表达水平呈正相关。

进一步地，上述肿瘤为宫颈癌。

本发明通过对常氧和缺氧状态下培养的宫颈癌细胞系中ZEB1和CD47的表达水平进行检测，发现缺氧宫颈癌细胞较常氧宫颈癌细胞中高表达ZEB1和CD47，利用慢病毒敲低或过表达宫颈癌细胞系ZEB1的表达，CD47的表达也随之降低或升高，并通过双荧光素酶证实ZEB1是CD47的上游转录因子，转录上调CD47的表达。

通过梯度超速离心法提取宫颈癌细胞系分泌的外泌体，发现ZEB1蛋白在缺氧宫颈癌细胞系来源的外泌体中富集；进一步在宫颈癌临床样本中验证，结果表明相比于早期宫颈癌患者，晚期宫颈癌患者血浆外泌体ZEB1的表达明显增高；患者血浆外泌体ZEB1相对表达水平和肿瘤组织CD47相对表达水平呈正相关，故而，通过对宫颈癌患者的血浆外泌体中ZEB1的表达水平进行实时检测，能够实现对肿瘤组织CD47的表达水平进行实时评估。