[发明专利]一种eef1b2基因敲除斑马鱼癫痫模型及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种sgRNA组合，其特征在于，所述sgRNA组合是用于CRISPANT特异性敲除斑马鱼eef1b2基因构建斑马鱼癫痫模型的sgRNA组合，其序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的一种sgRNA组合，其特征在于，所述敲除斑马鱼eef1b2基因是敲除斑马鱼eef1b2基因第二个外显子上6bp片段和5bp片段，其序列如SEQ ID NO.7和SEQID NO.8所示。

3.一种斑马鱼癫痫模型，其特征在于，所述斑马鱼癫痫模型是利用权利要求1所述的sgRNA组合敲除斑马鱼eef1b2基因来构建。

4.根据权利要求3所述的一种斑马鱼癫痫模型，其特征在于，所述敲除斑马鱼eef1b2基因是敲除斑马鱼eef1b2基因第二个外显子上6bp片段和5bp片段，其序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

5.一种构建斑马鱼癫痫模型的试剂盒，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1至SEQ IDNO.4所示的sgRNA组合。

6.根据权利要求5所述的一种构建斑马鱼癫痫模型的试剂盒，其特征在于，还包括Cas9蛋白。

7.权利要求1所述的sgRNA组合在构建斑马鱼癫痫模型中的应用，其特征在于，是利用所述sgRNA组合敲除斑马鱼eef1b2基因来构建斑马鱼癫痫模型。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述敲除斑马鱼hectd4基因是利用所述sgRNA组合敲除斑马鱼eef1b2基因第二个外显子上6bp片段和5bp片段，其序列如SEQ IDNO.7和SEQ ID NO.8所示。

9.权利要求3或4所述的斑马鱼癫痫模型在筛选抗癫痫药物中的应用。

10.一种斑马鱼癫痫模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)、靶向CRISPANT基因的sgRNA组合和检测引物的筛选：sgRNA组合序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示，检测引物序列如SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6所示；

2)、将4个sgRNA和Cas9蛋白混合物注射到斑马鱼的受精卵中；

3)、F0代突变斑马鱼筛选：筛选出敲除有效的胚胎，培养至成鱼，获得F0代突变斑马鱼；

4)、获得可遗传的斑马鱼突变体的F1代：将F0代突变斑马鱼与野生型斑马鱼杂交得到F1代胚胎，筛选存在突变的胚胎，培养至成鱼，筛选得到可遗传的斑马鱼突变体的F1代，其与野生型相比，eef1b2基因第二个外显子上存在两处缺失，分别为6bp片段和5bp片段，其序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。