[发明专利]一种HEK-293细胞无血清和悬浮培养的制备方法及其应用有效
| 申请号： | 202111014696.X | 申请日： | 2021-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN113717927B | 公开（公告）日： | 2022-11-18 |
| 发明（设计）人： | 孙秀莲 | 申请（专利权）人： | 宜明（北京）细胞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/073;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京智汇东方知识产权代理事务所(普通合伙) 11391 | 代理人： | 段丰娟 |
| 地址： | 100094 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 hek 293 细胞 血清 悬浮 培养 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种HEK-293细胞的无血清和悬浮培养的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)、无血清驯化；和(2)、悬浮驯化。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括a、HEK-293细胞复苏；b、将HEK-293细胞在血清浓度梯度递减的悬浮培养基中培养；c、将HEK-293细胞在低浓度血清的悬浮培养基中培养获得适合低血清浓度培养的细胞。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)b中血清的起始浓度为8-12％(体积)，优选的，所述血清浓度梯度递减的数值为2-5％(体积)。
4.如权利要求2-3任一所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)c中低血清浓度为血清浓度不超过2.5％。
5.如权利要求2-4任一所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)(c)包括在血清浓度梯度递减的悬浮培养基中培养，所述的浓度梯度递减为血清浓度逐渐降低，至接近于0％。
6.如权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括将步骤(1)获得的细胞在无血清培养基中悬浮驯化。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括a、将步骤(1)获得的细胞在无血清培养基中培养，利用外力使细胞悬浮；b、筛选悬浮细胞，摇床培养，获得HEK-293XS细胞系。
8.如权利要求1-7任一所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括步骤(3)、细胞冻存。
9.权利要求1-8任一所述的制备方法获得的细胞系。
10.权利要求9所述的细胞系的应用，其特征在于，所述应用包括外源基因导入，蛋白表达，制备包装病毒。
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