[发明专利]一种节约、省时的微量PCR方法

说明书

本发明公开了一种节约、省时的微量PCR方法，属于分子生物学领域。所述方法包括如下加样步骤：1)将PCR预混液加入PCR管管底；2)将DNA模板用水稀释；3)将稀释后的DNA模板全部加入到PCR管，离心混合，得到PCR反应体系。优选地，步骤3)中，将DNA模板加入到PCR管中部管壁。本发明的方法可在更小体积PCR体系下，提高PCR检测的精密度，降低检测误差，节约试剂，同时减少更换移液器吸头的次数，省时省力。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种节约、省时的微量PCR方法。

背景技术

实时荧光定量聚合酶链式反应，称为荧光定量PCR。该检测手段在PCR基础上，加入荧光基团，利用荧光信号变化，对其过程进行实时监测，从而达到对目的基因相对定量的目的。在荧光定量PCR过程中，需要构建PCR反应体系(通常为大于20μl)，包括配置的预混液(酶混合液，引物，灭菌水等)和DNA模板。PCR反应体系的加样，通常是先将配置的预混液分别加至PCR管中，再分别向预混液中加入2μl DNA模板。

由于每个PCR管中加入的DNA模板体积较小，特别是在需要构建小于20μl体积PCR反应体系，如10μl PCR反应体系时，易出现较大上样误差。且由于每次加入DNA模板时需触及预混液，所以每次模板上样需更换移液器吸头(也称为“枪尖”)，批量操作费时费力，一次性使用的吸头直接丢弃，也造成较大的浪费。

因此，提供一种节约、省时省力且误差小的PCR方法具有非常重要的意义。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种误差小且省时省力的PCR方法。

本发明的技术方案如下：

一种PCR反应体系加样方法，所述方法包括如下步骤：

1)将PCR预混液加入PCR管管底；

2)将DNA模板用水稀释3～6倍；

3)将DNA模板加入到PCR管，离心混合。

如前述的PCR反应体系加样方法，步骤3)中，将DNA模板加入到PCR管中部管壁。

如前述的PCR反应体系加样方法，步骤2)中，所述稀释倍数为4.2倍。

如前述的PCR反应体系加样方法，所述PCR反应体系总体积为10～25μl。

如前述的PCR反应体系加样方法，所述PCR反应体系总体积为10μl。

一种PCR方法，所述PCR方法使用前述PCR反应体系加样方法配制PCR反应体系。

如前述的PCR方法，所述PCR为实时荧光定量PCR。

本发明的有益效果如下：

1.本发明通过加样前稀释DNA模板，可在更小PCR反应体系(10μl)中，提高PCR检测的精密度，节约试剂。

2.本发明通过将DNA模板加到PCR管中部管壁，可减少更换枪尖的次数，省时省力，节约枪尖。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

本发明所用试剂和仪器：

TaKaRaPremix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)(RR820Q，TaKaRa)。