[发明专利]用于检测牛呼吸道病毒的引物探针组合、试剂盒及应用

说明书

本公开提供一种用于检测牛呼吸道病毒的引物探针组合、试剂盒及应用。本公开提供的用于检测牛呼吸道病毒的引物探针组合、试剂盒及应用，基于多重荧光PCR能够快速准确地同时鉴别牛四种主要的呼吸道病毒(BHV‑1、BRSV、BPIV‑3和BVDV)，检测灵敏度高，特异性强且高通量。基于多重荧光PCR技术检测牛呼吸道病毒的试剂盒，可用于检测高灵敏且特异检测病原核酸分子。该试剂盒进行检测的方法比普通PCR检测方法更灵敏且更特异，使检测减少核酸污染。

技术领域

本公开涉及牛呼吸道病毒检测技术领域，尤其涉及一种用于检测牛呼吸道病毒的引物探针组合、试剂盒及应用。

背景技术

牛呼吸道疾病综合征(Bovine Respiratory Disease Complex，BRDC)又称运输热，近年来在国内外频繁报道，呈世界性广泛分布，多呈地方性或散发性流行，发病率和死亡率较高，给养牛业所造成的经济损失不容忽视。引发该疾病发生的病原种类繁多，通常由一种或数种病原单独或混合感染引起，例如牛疱疹病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒或牛病毒性腹泻病毒等。

牛疱疹病、牛呼吸道合胞体病、牛副流感或牛病毒性腹泻是一种急性、热性、接触性的呼吸道传染病，给养牛业造成巨大的经济损失。在临床诊断过程中这四种病具有比较相似的临床症状，且常呈混合感染，使得其诊断和防治变得困难。

常规的PCR费时费力，灵敏度和准确性低，易出现假阳性。因此，亟需一种准确快速的检测方法进行早期快速诊断。

发明内容

有鉴于此，本公开的目的在于提出一种用于检测牛呼吸道病毒的引物探针组合、试剂盒及应用。

基于上述目的，本公开提供了用于检测牛呼吸道病毒的引物探针组合，包括如下组合中的一种或两种以上：

组合一：

(1)、上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；和

(2)、下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；和

(3)、荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

和/或

组合二：

(4)、上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；和

(5)、下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；和

(6)、荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

和/或

组合三：

(7)、上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；和

(8)、下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；和

(9)、荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

和/或

组合四：

(10)、上游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；和

(11)、下游外部引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；和

(12)、荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。

本公开还提供了所述的引物探针组合在制备牛呼吸道病毒检测的试剂盒中的应用。

在一些实施例中，所述牛呼吸道病毒为牛疱疹病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒和牛病毒性腹泻病毒中的一种或多种。