[发明专利]构建谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌的方法有效
| 申请号： | 202111019543.4 | 申请日： | 2021-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN113621640B | 公开（公告）日： | 2023-09-19 |
| 发明（设计）人： | 范文超;杨海锋;高书良;丁鹏 | 申请（专利权）人： | 浙江华睿生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;C12N15/52;C12P13/04;C12R1/865 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 贾师英 |
| 地址： | 313000 浙江省湖州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 构建 谷氨酸 半胱氨酸 二肽 生产 方法 | ||
1.一种只产生谷胱二肽、但不产生谷胱甘肽的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，通过包括以下步骤的方法构建：
A.在酵母菌S288C基因组中整合入一个以上拷贝的γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因gshA，所述γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶是大肠杆菌来源的gshA酶，其氨基酸序列为SEQ IDNO:1，筛选阳性克隆；
B.筛选得到生产谷氨酸-半胱氨酸二肽的酵母菌。
2.如权利要求1所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，步骤A是在酵母菌基因组中整合入两个以上拷贝的基因gshA，筛选阳性克隆。
3.如权利要求1所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，步骤A是在酵母菌基因组中整合入三个以上拷贝的基因gshA，筛选阳性克隆。
4.如权利要求1-3中任一项所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，步骤A中所述的酿酒酵母S288C是上海工业生物技术研发中心提供的酿酒酵母S288C。
5.如权利要求1所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，所述基因gshA的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。
6.如权利要求1所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，步骤A中采用质粒转化、同源重组技术或者基因编辑技术将基因gshA整合入酵母菌基因组。
7.如权利要求6所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，所述基因编辑技术采用CRISPR-Cas9系统。
8.如权利要求6所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌，其特征在于，所述基因编辑技术采用CRISPR-Cpf1系统、CRISPR-Cas相关的转座系统INTEGRATE系统或者CAST系统。
9.如权利要求1-8中任一项所述的谷氨酸-半胱氨酸二肽生产菌在生产谷胱二肽中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，通过菌株的发酵来生产谷胱二肽。
11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，发酵培养基中添加谷氨酸和半胱氨酸。
12.如权利要求11所述的应用，其特征在于，发酵培养基是如下组成的YPD-GC培养基：10g/L酵母提取物，20g/L胰蛋白胨，20g/L葡萄糖，在发酵培养至48h，添加1wt％的谷氨酸和1.5wt％半胱氨酸。
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