[发明专利]包括至少一个切向流过滤步骤的产生和纯化RNA的方法

权利要求书

1.一种产生和纯化RNA的方法，包括以下步骤：

A)提供编码所述RNA的DNA；

B)体外转录所述DNA以产生包含转录出的RNA的溶液；和

C)通过一个或多个切向流过滤(TFF)步骤渗滤和/或浓缩和/或纯化所述包含转录出的RNA的溶液，

其中步骤C)包括至少一个利用TFF的渗滤步骤，并且其中步骤C)中所述至少一个利用TFF的渗滤步骤包括采用盐水溶液的渗滤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述盐水溶液包含碱金属卤化物、有机盐、碱土金属卤化物、或碱金属磷酸盐、或它们的组合。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述盐水溶液包含碱金属卤化物、或碱土金属卤化物、或它们的组合。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述盐水溶液包含NaCl、LiCl、KCl、NaOAc、CaCl₂、Na₃PO₄、Na₂HPO₄和/或NaH₂PO₄。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述盐水溶液包含NaCl、LiCl、KCl和/或CaCl₂。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述盐水溶液包含约0.1M的碱金属卤化物至约1M的碱金属卤化物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述盐水溶液包含约0.1M的NaCl至约1M的NaCl。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在步骤A)中提供质粒DNA作为编码所述RNA的DNA，并且所述方法包括步骤A)之后的步骤：

A1)在线性化反应中线性化所述质粒DNA；

A2)任选地终止所述线性化反应；和

A3)通过一个或多个TFF步骤调节和/或纯化包含线性化的质粒DNA的线性化反应物。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中在体外转录混合物的存在下进行体外转录所述DNA，其中所述体外转录混合物包含聚阳离子脂肪族胺。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述至少一个或多个TFF步骤包括使用TFF中空纤维膜或TFF膜盒。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述至少一个或多个TFF步骤包括使用截留分子量为≤500kDa、优选为≤200kDa且最优选为≤100kDa的TFF膜。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述至少一个或多个TFF步骤包括使用包含聚醚砜(PES)、改性聚醚砜(mPES)、纤维素衍生物膜或它们的组合中的至少一种的TFF膜。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤C)中包括在所述一个或多个TFF步骤之前或之后的至少一种另外的纯化方法。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述至少一种另外的纯化方法通过高效液相色谱法(HPLC)或低常压液相色谱法进行。

15.根据权利要求13或14中任一项所述的方法，其中所述至少一种另外的纯化方法是反相色谱法。