[发明专利]牛传染性鼻气管炎病毒的竞争ELISA抗体检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.抗牛传染性鼻气管炎病毒的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No. 23005的杂交瘤细胞所分泌。

2.分泌权利要求1所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No. 23005。

3.牛传染性鼻气管炎病毒的抗体检测试剂盒，其包含权利要求1所述的抗牛传染性鼻气管炎病毒的单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含截短的牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含酶标板；所述截短的牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白被预先包被在酶标板上或临用前包被在酶标板上。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述截短的牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白在酶标板上的包被量为0.1～5μg/孔；所述单克隆抗体的工作浓度为0.2～2μg/mL。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含抗原包被液；所述抗原包被液为0.02mol/L、pH值为6.5±0.2的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含封闭液；所述封闭液为含0.1% Casein和5%蔗糖的PBS溶液。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含样品稀释液；所述样品稀释液为含1.5% BSA的PBS溶液。

10.一种非诊断目的的牛传染性鼻气管炎病毒的抗体检测方法，其特征在于：使用权利要求4-9任一所述的试剂盒进行检测，包括如下步骤：

（1）用0.02mol/L、pH值为6.5±0.2的磷酸盐缓冲液将所述截短的牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白包被在酶标板上，包被量为0.1～5μg/孔，孵育；洗酶标板；

（2）加入含0.1% Casein和5%蔗糖的PBS溶液，封闭；洗酶标板；

（3）设置样品孔、阴性对照孔和阳性对照孔；将待检样品用含1.5% BSA的PBS溶液按1:2稀释后，加入样品孔中；再向所有孔内加入浓度为0.2～2μg/mL的酶标单克隆抗体溶液，孵育；洗酶标板；

（4）加入显色液，孵育；

（5）加入终止液，轻轻混匀后在酶标仪中读取450nm处的吸光值；

（6）计算S/N值，S/N值＝样品孔的OD_450nm值／阴性对照孔的OD_450nm值；若S/N值＞0.7，则样品中不含有牛传染性鼻气管炎病毒的抗体；若S/N值≤0.7，则样品中含有牛传染性鼻气管炎病毒的抗体。