[发明专利]RNAi改良栽培茄的方法

权利要求书

1.栽培茄SmHQT基因核心片段的RNAi表达载体，该SmHQT基因核心片段序列如SEQ IDNo.3所示。

2.如权利要求1所述的RNAi表达载体，其特征是，所述RNAi表达载体的构建包括：以pBin19载体为骨架载体，在多克隆酶切位点处插入顺序连接的CaMV35S启动子、栽培茄SmHQT基因核心片段的正向序列、DET内含子、栽培茄SmHQT基因核心片段的反向序列和Nos终止子表达框。

3.如任一在先权利要求所述的RNAi表达载体，其特征是，其构建包括：

a.以含SEQ ID No.3所示序列的重组质粒为模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.1为引物进行PCR扩增，将扩增产物用HindIII和XbaI双酶切，再与经同样双酶切的pHBLD载体连接，获得重组质粒pHBLD-SmHQT；

b.按步骤a的方法进行PCR扩增或者直接使用步骤a所得PCR扩增产物，将扩增产物用KpnI和XhoI双酶切，再与经同样双酶切的重组质粒pHBLD-SmHQT连接，获得重组质粒pHBLD-SmHQTi；

c.将步骤b所得重组质粒pHBLD-SmHQTi用SacI和SpeI双酶切，再与经SacI和XbaI双酶切的pBin19载体连接，得所述RNAi表达载体。

4.如前一权利要求所述的RNAi表达载体，其特征是，所述含SEQ ID No.3所示序列的重组质粒的制备方法包括：以含栽培茄SmHQT基因序列的cDNA为模板，以SEQ ID No.2和SEQID No.1为引物进行扩增，将扩增产物与pMD-T19载体连接，得含SEQ ID No.3所示序列的重组质粒。

5.如前一权利要求所述的RNAi表达载体，其特征是，所述SmHQT基因的GenBank号为KT259042.1。

6.含有任一在先权利要求所述RNAi表达载体的微生物转化体。

7.如前一权利要求所述的微生物转化体，其特征是，其是以农杆菌为受体而转化得到的，农杆菌可为LBA4404。

8.培育绿原酸合成量低和/或果肉在有氧环境中褐化程度和/或褐化速度低的栽培茄的方法，包括干扰其SmHQT基因的表达。

9.如前一权利要求所述的方法，其特征是，所述合成量低表现在栽培茄嫩叶、成熟叶和果实中的至少一处。

10.如任一在先权利要求所述的方法，其特征是，所述方法使用了SEQ ID No.3所示核酸片段、任一在先权利要求所述的RNAi表达载体，和/或任一在先权利要求所述的微生物转化体。