[发明专利]一种油佐剂疫苗破乳剂及应用

说明书

本发明公开了一种双相油佐剂疫苗破乳剂，所述破乳剂包括氯仿、硫酸铵，所述氯仿与疫苗乳液的体积比为2：1~2，硫酸铵与疫苗乳液的质量体积比为1:5~20。本发明可有效快速分离双相油佐剂疫苗中的水相和油相，破乳时间短，使用试剂少，操作简单，对操作环境要求低，室温下即可操作，分离水相为上层清液，水相明显，便于提取水相，能够明显提高抗原的回收。

技术领域

本发明涉及一种双相油佐剂疫苗破乳剂及其制备方法、应用，属于生物技术领域。

背景技术

如何高效快速的油佐剂疫苗质量一直是人们关注的焦点，现有的疫苗质量标准中规定效力检验必须采用本动物进行检验，由于国家实行100％的强化免疫政策，很难选出易感的检验用动物，而且动物攻毒对实验设施要求高(BSL3级实验室)、耗时长(一个月以上)、资金花费大。如果采用血清中和试验选择易感动物，在技术上难以排除具有细胞免疫的非易感动物，在检验实际中经常发生检验数据不规律的问题，影响检验的准确性。因此国家对疫苗的检验也慢慢转化为到对疫苗中的抗原进行检测，代替现有的本动物试验。目前普遍使用的方法是，先将疫苗进行破乳，使水相从乳液中析出，然后对析出的水相中抗原含量进行检测分析，然而现有的破乳方法及破乳剂并不适用于所有的油佐剂疫苗，使用传统破乳剂对油佐剂疫苗进行破乳，虽然能将疫苗破乳，但是其水相中的抗原含量极低。不同破乳剂的破乳效率与破乳效果层次不齐。而本发明破乳时间短，在加入破乳剂后既能完成破乳，离心后取水相即可抽取水相，并能够明显提高抗原的回收。

虽然业内已有破乳方法，但其效率和效果均不佳，传统的破乳方法破乳后会有种种问题，例如不同疫苗使用不同破乳剂、破乳不完全、水相和油相分界不清晰、水相中检测不到抗原等问题一直困扰着业界。如何去寻找一种通用且高效的破乳方法及如何使得疫苗内抗原进入水相成了业内亟待解决的问题。

中国专利CN 103088157B中提到在提取所述口蹄疫病毒RNA时，加入正戊醇作为破乳剂。但以正戊醇为破乳剂，其效率低，适用并不广泛，且针对合成肽疫苗时其水相中并不能检测到抗原组分；中国专利CN106814152A中提到的用有机溶剂与酸的混合物作为破乳剂，其使用有机溶剂种类繁多，操作复杂，破乳后需要-80～-50℃温度下真空冷冻12～18h，设备成本高，且分离水相在下层，不便于提取。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：针对目前动物油佐剂疫苗质量检测中，动物检测难度较大且数据不规律的问题和现有一些破乳剂的效率和效果不佳的问题，提供一种破乳剂的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：

一种双相油佐剂疫苗破乳剂，所述破乳剂包括氯仿、硫酸铵，所述氯仿与疫苗乳液的体积比为2：1~2，硫酸铵与疫苗乳液的质量体积比为1:5~20。

如权利要求1所述的双相油佐剂疫苗破乳剂的破乳方法，将破乳剂加入双相油佐剂疫苗中，振荡混匀，然后离心10-20分钟，水相和油相完全分离出来。

所述离心条件为3000-5000 rpm。

所述的破乳剂在双相油佐剂疫苗回收抗原中的应用。

本发明的有益技术效果是：可有效快速分离双相油佐剂疫苗中的水相和油相，破乳时间短，使用试剂少，操作简单，对操作环境要求低，室温下即可操作，分离水相为上层清液，水相明显，便于提取水相，能够明显提高抗原的回收。

附图说明

图1为破乳试验的水相层和油相层分离图。

具体实施方式

由于口蹄疫病毒实验需要在生物安全三级实验室操作，所以选用与口蹄疫病毒大小及性状相似的猫杯状活病毒代替，亦可充分显示破乳剂的效果。

下面将结合实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。