[发明专利]菠萝叶片高效离体再生方法

权利要求书

1.一种菠萝叶片高效离体再生方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）愈伤组织诱导：

a) 取菠萝消毒后的幼嫩无菌叶片或组培苗的叶片接种至愈伤诱导培养基I，所述愈伤诱导培养基I是MS基本培养基+2-4mg/L 6-BA+0.2-0.4mg/L NAA+0.1 g/L肌醇，暗培养10-20天；

b) 将上述暗培养后的材料转入愈伤诱导培养基II，所述愈伤诱导培养基II是MS基本培养基+2-3mg/L NAA+0.2-0.3mg/L 6-BA+0.5-1.5mg/L TDZ+0.1 g/L肌醇+0.5 g/L脯氨酸，光照培养；

（2）不定芽诱导：将第（1）步获得的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基I，所述不定芽诱导培养基I是MS基本培养基+1.5-2.5mg/L 6-BA与0.15-0.25 mg/L NAA+0.1 g/L肌醇，光照培养，每日32℃-37℃培养12-18 h和22℃-28℃培养6-12 h，培养10-20天后转入不定芽诱导培养基II，所述不定芽诱导培养基II是MS培养基+0.3-1mg/L 6-BA+0.03-0.1 mg/L NAA+0.1 g/L肌醇，培养20-35天；

（3）不定芽伸长：将第（2）步获得的不定芽转入不定芽伸长培养基，所述不定芽伸长培养基是MS基本培养基+0.1-0.5mg/L 6-BA+0.01-0.05 mg/L NAA+0.01-0.1 mg/L独脚金内酯+0.1 g/L肌醇，光照培养20-40天；

（4）生根培养：将第（3）步中不定芽诱导出的丛芽分成单株，接种至生根培养基中，诱导生根实现再生。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养基I中 6-BA为3mg/L，NAA为0.3mg/L。

3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养基II中 NAA为2mg/L，6-BA为0.2mg/L，TDZ为1mg/L。

4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，不定芽诱导培养基I中 6-BA 2mg/L， NAA为0.2 mg/L，光照培养，每日35℃培养15-17 h和25℃培养7-9 h。

5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，不定芽诱导培养基II中6-BA为0.5mg/L，NAA为0.05 mg/L。

6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不定芽伸长培养基中 6-BA为0.3mg/L，NAA为0.03 mg/L，独脚金内酯为0.05 mg/L。

7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培养基是1/2MS基本培养基+0.1-1mg/L吲哚丁酸，培养14-21 d至生根。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括下述步骤：

（5）炼苗：挑选步骤（4）中已生根且长势健壮的瓶苗进行炼苗。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述炼苗方法为：将培养瓶盖打开，注入0.5-1cm清水，置于室温、自然光照下，静置2-3天，将瓶苗掏出，将基部附着的培养基洗净，准备移栽。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，进一步包括下述步骤：

（6）移栽：将步骤（5）炼苗后再生苗进行移栽。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述移栽中，移栽基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，移栽前将基质连盆浸入水中使其完全润湿，移栽后套袋保湿，湿度不够时使用喷壶喷洒植株表面，待苗生长强健后除去套袋，正常养护。

12.如权利要求1至7任一项所述的方法，其特征在于，所述光照培养的光照强度为2000-3000lx。