[发明专利]TGFβRII突变体及其应用

说明书

本发明提出了一种TGFβRII突变体及其应用，该TGFβRII突变体相较于TGFβRII胞外结构域的氨基酸序列，具有如下位点的突变：第13位、第16位氨基酸中的至少一位，或第13位、第16位中的至少之一位和第14位、第15位、第19位氨基酸中的至少之一位。根据本发明所述的TGFβRII突变体具有与TGFβ结合的生物活性，其氨基酸序列不易被解离，因此，所述TGFβRII突变体与天然TGFβRII具有一致的生物活性，且生产过程中碎片含量显著降低，通过与肿瘤细胞表面TGFβ结合以达到控制肿瘤微环境中TGFβ含量的目的，从而有效预防和治疗肿瘤。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，涉及TGFβRII突变体及其应用，更具体地，涉及TGFβRII突变体、融合蛋白、药物组合物、所述TGFβRII突变体或融合蛋白在制备药物中的用途、制备所述融合蛋白的方法、降低制备所述融合蛋白过程中碎片含量的方法。

背景技术

转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGFβ)是属于调节细胞生长和分化的TGFβ超家族。这一家族除TGFβ外，还有活化素、抑制素、缪勒氏管抑制质和骨形成蛋白。机体多种细胞均可分泌非活性状态的TGFβ。在体外，非活性状态的TGFβ又称为latencyassociated peptide(LAP)，通过酸裂解可被活化。在体内，酸性环境可存在于骨折附近和正在愈合的伤口。蛋白本身的裂解作用可使TGFβ复合体变为活化TGFβ。

TGFβ可以抑制丝裂原、同种异体抗原刺激的T细胞增殖或IL-2依赖的T细胞生长，也可以抑制IFN-γ诱导黑素瘤细胞MHCⅡ类抗原表达，并且，TGFβ还可以抑制PBMC中IFN-γ和TNF-α的产生，并促进IL-6的表达。

TGFβ在肿瘤中以细胞背景依赖的方式发挥肿瘤抑制或肿瘤促进的而作用。TGFβ能够抑制原癌基因c-myc的表达，但在肿瘤发展过程中，随着突变的引入或表观遗传修饰的变化后，癌细胞逐渐耐受TGFβ信号的抑制作用，最终导致肿瘤的发展。

近年的研究发现，肿瘤微环境中TGFβ增加与免疫逃逸相关，TGFβ的增加会增加T细胞排斥，阻断TH1效应T细胞的浸润。Tauriello等人发现TGFβ阻断使小鼠肝转移癌症模型对PD1/PDL1疗法更敏感，而类似的Mariathasan等人报道了TGFβ阻断和PD-L1抗体联用，可以下调基质细胞的TGFβ信号通路，促进T细胞渗透进肿瘤中，激活强烈的抗肿瘤免疫反应；因此，选择性抑制肿瘤细胞周围的表达上调的TGFβ，逐渐成为治疗肿瘤的热门治疗策略。

目前，通过构建重组细胞生产TGFβ受体存在剪切物质多、碎片多的问题，融合蛋白在经过平台工艺的初步纯化后仍含有一部分与目标产物性质非常接近的杂质，这些杂质一般为目标蛋白部分断裂后形成的异构体，其等电点与分子量接近产物的对应指标，现有纯化工艺平台已无法实现该蛋白的高效分离纯化，严重影响了蛋白的成药性。因此，仍需积极探索如何降低生产TGFβ受体过程中的碎片含量，该研究方向对预防或治疗肿瘤疾病具有重要意义。

发明内容

本申请是基于发明人对以下问题的发现和认识作出的：

瞬时转染人HEK-293F细胞产生的TGFβRII Trap包含不同程度的剪切物质，碎片较多，并且不易通过纯化除去，大大降低了制备效率和产量，严重影响成药性。本发明中，发明人通过大量实验研究，将易生成碎片的序列或位点进行突变，获得了TGFβRII突变体，并利用TGFβRII突变体制备了融合蛋白，经过实验筛选及验证后，意外地获得了生产过程中碎片含量低的融合蛋白，融合蛋白与TGFβ具有较高的体外结合活性，成药效果得到显著提升，可通过控制肿瘤细胞周围表达上调的TGFβ的含量来预防或治疗肿瘤。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种TGFβRII突变体片段。根据本发明的实施例，相较于TGFβRII胞外结构域的氨基酸序列，所述TGFβRII突变体片段，具有如下位点的突变：第13位、第16位氨基酸中的至少之一位，或第13位、第16位中的至少之一位和第14位、第15位、第19位氨基酸中的至少之一位。