[发明专利]腺相关病毒突变体及其应用

说明书

本发明涉及生物领域中的病毒体及其应用，具体公开了一种具有心脏靶向性的腺相关病毒突变体及其应用，其中异源肽为：(a)由SEQ ID No:15所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或者，(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有异源肽活性的由(a)衍生出的蛋白质。并且利用本发明AAV衣壳蛋白突变体构建得到的重组腺相关病毒病毒体特异性高，安全性好，免疫原性低，应用范围广泛，并且对心脏的感染性好，靶向性佳，在小鼠体内表达外源基因时间长。

本申请是CN112194706A(申请日为2020年09月30日、申请号为202011070091.8、发明创造名称为腺相关病毒突变体及其应用)的分案申请。

技术领域

本发明涉及生物领域中的病毒体及其应用，尤其是涉及一种具有心脏靶向性的腺相关病毒突变体及其应用。

背景技术

腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)，也称腺伴随病毒，属于微小病毒科依赖病毒属，是目前发现的一类结构最简单的单链DNA缺陷型病毒，需要辅助病毒(通常为腺病毒)参与复制。AAV基因组为4.7kb左右的单链DNA片段，包含于直径20nm的正二十面体非包膜病毒衣壳中，可分成三个功能区域：两个开放阅读框(Rep基因、Cap基因)和末端反向重复序列(ITR)。Rep基因的开放阅读框编码4个多功能非结构蛋白家族(Rep)蛋白，即Rep40、Rep52、Rep68与Rep78，主要功能涉及病毒/载体基因组的复制、转录的调控、整合以及AAV基因组的组装。Cap基因的开放阅读框编码三个衣壳蛋白VP1、VP2和VP3，分子量为别为87、73、61kDa，是装配成完整病毒所需的衣壳蛋白，它们在病毒整合、复制和装配中起重要作用。衣壳蛋白序列之间的差异导致不同血清型的AAV与不同的细胞表面受体结合，这使得不同AAV血清型具有不同的组织嗜性。末端反向重复序列(ITR)在AAV基因组的5’和3’末端形成两个T字形结构，作为复制起点并在病毒基因组整合入宿主基因组，在随后的从整合状态中拯救病毒DNA的过程中均发挥了非常关键的作用。

重组腺相关病毒载体(rAAV)源于非致病的野生型腺相关病毒，由于其具有宿主范围广、非致病性、低免疫原性、长期稳定表达外源基因、良好的扩散性能和物理性质稳定等优点，已被广泛地应用于基础研究和临床试验中，被视为最有前途的基因转移载体之一，在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。经过10余年的研究，重组腺相关病毒的生物学特性己被深入了解，尤其是其在各种细胞、组织和体内实验中的应用效果方面已经积累了许多资料。在医学研究中，rAAV被用于多种疾病的基因治疗的研究(包括体内、体外实验)；同时作为一种有特点的基因转移载体，还广泛用于基因功能研究、构建疾病模型、制备基因敲除鼠等方面。

在20世纪80年代开始开发AAV2作用于基因治疗的载体以来，已经开发了涉及允许靶向患者的特定组织和细胞亚型的过程的新的平台，这些方法的核心技术是基于现有的AAV变体(血清型)和试错评估和随机引入的AAV衣壳突变体的体内选择。

有中国专利文献CN106062200B公开了一种重组腺相关病毒载体，包括变体AAV2衣壳蛋白，所述变体AAV2衣壳蛋白相对于野生型AAV2衣壳蛋白包含至少4个氨基酸取代，将其重组腺相关病毒载体在制备用于将基因产物递送至受试者的神经元、视网膜或肝脏组织的药物中的用途；目前重组腺相关病毒对心脏方面的相关研究尚少，仍然需要改善重组腺相关病毒在体内转基因表达和组织特异性方面的特性。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种具有心脏靶向性的异源肽、腺相关病毒衣壳蛋白突变体及其应用，与rAAV9相比，利用本发明腺相关病毒突变体构建的重组腺相关病毒病毒体对心脏具有更好的感染性，安全性好，免疫原性低宿主范围广可高效感染分裂和非分裂细胞等；并且从动物体内筛选得到的AAV衣壳蛋白突变体性质稳定。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种异源肽，所述异源肽为：