[发明专利]比活提高的酰胺酶变体及其应用

权利要求书

1.一种比活提高的酰胺酶变体，其特征在于，所述酰胺酶变体包括选自以下对应于SEQID NO:1所示氨基酸序列的一个或多个位置的突变：第2位、第153位、第155位、第273位、第278位、第448位、第450位、第498位、第518位。

2.如权利要求1所述酰胺酶变体，其特征在于，所述突变选自以下对应于SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的一个或多个位置：第2位氨基酸突变成丙氨酸、甘氨酸或蛋氨酸，第153位氨基酸突变成丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸或缬氨酸，第155位氨基酸突变为丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸或缬氨酸，第273位氨基酸突变为赖氨酸、蛋氨酸或精氨酸，第278位氨基酸突变为半胱氨酸，第448位氨基酸突变为丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸或缬氨酸，第450位氨基酸突变为丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸或缬氨酸，第498位氨基酸突变为半胱氨酸，第518位氨基酸突变为天冬氨酸、蛋氨酸或精氨酸。

3.如权利要求1或2所述酰胺酶变体，其特征在于，所述突变位点包括第153位、第155位、第273位、第278位、第498位、第518位中的至少两个。

4.如权利要求1-3任一项所述酰胺酶变体，其特征在于，所述突变选自以下任一组：

A278C,S498C；

M153A/M153G/M153V/M153L/M153P/M153I中任一个；

M155A/M155V/M155L/M155P/M155I中任一个；

M450A/M450V/M450L/M450P/M450I中任一个；

M448A/M448V/M448L/M448P/M448I中任一个；

R2G/R2A/R2M中任一个；

E273K/E273R/E273M中任一个；

E518R/E518D/E518M中任一个；

A278C,S498C,E273K；

A278C,S498C,E273R；

A278C,S498C,E518D；

E273K,E518R；

E273K,E518D；

A278C,S498C,E273K,E518R；

A278C,S498C,E273K,E518D；

A278C,S498C,E273K,M153A；

A278C,S498C,E273K,M153V；

E273K,E518R,M153A；

E273K,E518D,M153A；

E273K,E518R,M153V；

E273K,E518D,M153V；

A278C,S498C,E273K,E518R,M153A；

A278C,S498C,E273K,E518R,M153V；

A278C,S498C,E273K,M155A；

A278C,S498C,E273K,M155V；

E273K,E518R,M155A；

E273K,E518R,M155V；

A278C,S498C,E273K,E518R,M155A；

A278C,S498C,E273K,E518D,M155A；

A278C,S498C,E273K,E518R,M155V；

A278C,S498C,E273K,E518D,M155V。

5.如权利要求1所述酰胺酶变体，其特征在于，所述酰胺酶变体氨基酸序列选自SEQ IDNO:3～56所示的序列。

6.编码权利要求1-5任一项酰胺酶变体的核苷酸。

7.包含权利要求6所述核苷酸的表达载体。

8.包含权利要求7所述表达载体的宿主细胞。

9.如权利要求8所述的宿主细胞，包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、大肠杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母、里氏木霉、黑曲霉和米曲霉。

10.采用权利要求1-5任一项所述的酰胺酶变体制备右旋酮洛芬的方法，其特征在于，使酰胺酮洛芬在酰胺酶变体的催化下进行脱氨基反应，以便获得右旋酮洛芬。