[发明专利]一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明所述Neu‑Ex的制备原料包括hucMSC‑Ex和Neu‑NVs，将所述hucMSC‑Ex和Neu‑NVs超声混合后挤压得Neu‑Ex。所述Neu‑Ex可以分装后于‑80℃长期保存，易于储存和使用，Neu‑Ex可直接用于顺铂诱导的急性肾损伤预防和治疗，效果显著；而且所述Neu‑Ex按照微粒计数，使用剂量便于掌握，可用于制备防治急性肾损伤的药用制剂。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用。

背景技术

急性肾损伤(AKI)，是由多种病因引起的肾功能快速下降而出现的临床综合征，是临床上极为常见的急性并发症之一，具有高的发病率和死亡率特点。其主要表现为尿少或无尿、肿胀、食欲不振等，大多数患者需要住院接受治疗。在住院患者中，近20％患有AKI，死亡率更高，结果较差，其预后与脓毒症、创伤、糖尿病、年龄等诸多危险因素有关。目前尚没有真正有效的药物用于治疗AKI。多项预临床研究表明，hucMSC-Ex在治疗AKI中效果显著，但外泌体对肾损伤部位的靶向性不足限制了其临床应用。

近年来，以干细胞尤其是脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymalstem cell，hucMSC)为代表的细胞移植疗法，在防治急慢性肾损伤的医学研究得到了广泛的关注。研究显示，hucMSC可通过直接分化为受损肾脏细胞、或通过旁分泌作用、免疫调节等作用机制发挥肾保护作用，在急慢性肾损伤防治中具有广阔的临床转化和应用前景。然而，MSC植入体内后存在长期应用安全性问题以及储存和运输困难等问题，极大的限制其临床应用，寻找能够替代MSC在组织损伤修复中作用的生物材料或干细胞制品显得十分迫切。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用，所述嵌合膜囊泡的稳定性更好，靶向性更强，对急性肾损伤的预防和/或治疗效果更佳，具有更好的商业化前景。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种嵌合膜囊泡，所述嵌合膜囊泡的制备原料包括：人血中性粒细胞来源的纳米囊泡和人脐带间质干细胞来源的外泌体；

所述纳米囊泡和外泌体的数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。

优选的，所述纳米囊泡的制备方法，包括：中性粒细胞膜蛋白冰浴超声2～5min后，依次挤压通过孔径为400nm、200nm和100nm的多聚碳酸酯膜，得所述纳米囊泡。

优选的，所述超声的功率为100W，每超声3s后间隔10s再超声。

优选的，所述外泌体的制备方法包括利用质量百分浓度为30％的蔗糖密度梯度离心法，从人脐带间质干细胞的上清中分离获得所述外泌体。

本发明还提供了上述嵌合膜囊泡的制备方法，包括以下步骤：将所述纳米囊泡和所述外泌体冰浴超声混匀2～5min后，依次挤压通过孔径为400nm、200nm和100nm的多聚碳酸酯膜，得所述嵌合膜囊泡。

优选的，所述超声的功率为100W，每超声3s后间隔10s再超声。

本发明还提供了上述嵌合膜囊泡在制备预防和/或治疗急性肾损伤药物中的应用。

本发明还提供了一种预防和/或治疗急性肾损伤的药物，所述药物包括上述嵌合膜囊泡。

有益效果：本发明提供了一种嵌合膜囊泡(Neu-Ex)，Neu-Ex直径分布在30～200nm大小，膜电位比嵌合前的人脐带间质干细胞外泌体(hucMSC-Ex)和人血中性粒细胞来源的纳米囊泡(Neu-NVs)的两组绝对值更高；融合后的Neu-Ex具有典型的球形结构；Neu-Ex表达hucMSC-Ex和Neu-NVs细胞共同的蛋白组分。