[发明专利]乌苯苷在制备下调肿瘤细胞PD-L1水平的制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种乌苯苷在制备下调肿瘤细胞PD‑L1水平的制剂中的应用，其中有效下调肿瘤细胞PD‑L1水平的乌苯苷的浓度为100～200nmol/L。本发明证明了乌苯苷可以通过改变细胞质中Ca²⁺稳态来诱导肿瘤细胞产生内质网应激，干扰PD‑L1正常的糖基化修饰。内质网应激后，PD‑L1进而被RNF19B识别并进行泛素化，最终导向蛋白酶体降解。本发明还揭示RNF19B会影响USP22与PD‑L1的结合，减弱PD‑L1在肿瘤细胞内的稳定性。本发明的应用实现了通过下调肿瘤中的PD‑L1水平抑制肿瘤的发展，为研制开发有关制备下调肿瘤细胞PD‑L1水平的制剂奠定了基础，也为传统药物在肿瘤治疗领域中的二次开发提供了一定的参考和启示，为提高免肿瘤疫疗法的技术手段和临床疗效提供了新的策略。

技术领域

本发明涉及钠-钾ATP酶抑制剂乌苯苷的应用，尤其涉及乌苯苷在制备下调肿瘤细胞 PD-L1(Programmed Cell Death 1Ligand 1，细胞程序性死亡受体配体1，又称为CD274或 B7-H1)水平的制剂中的应用，属于生物医药和分子生物学技术领域。

背景技术

PD-L1是存在于肿瘤细胞质膜的糖蛋白，通过与T淋巴细胞表面的PD-1(Programmed Death Receptor1，细胞程序性死亡受体-1)结合后，抑制T细胞的增殖、细胞因子的释放和 杀伤能力，最终导致免疫系统功能的抑制。针对PD-1/PD-L1通路目前正在或已经开展的临 床实验已有报道，在临床诊治某些癌症，比如黑色素瘤、非小细胞型肺癌、膀胱癌、乳腺癌、 淋巴癌以及肾脏细胞癌方面都收获了不错的效果。目前上市的相关药物主要有 pembrolizumab、nivolumab、pidilizuma、durvalumab、atezolizumab等单克隆抗体。但是，随 着肿瘤免疫治疗的进一步开展，其使用效率并非尽如人意，脱靶效应、抗药性以及潜在的毒 副作用等相继出现。

天然小分子化合物一直是治疗癌症等重点疾病的药物来源，通过药物的筛选寻找具有抗 癌活性的小分子化合物，具有快速、经济、简便、有效的特点。天然活性的化合物还可以作 为先导物通过适当的结构改造便有望成为新一代的肿瘤免疫治疗药物。因此寻找能够下调肿 瘤细胞中PD-L1表达的天然小分子化合物也是目前热门的科研课题。

乌苯苷是一种甾类糖苷，别名g-毒毛旋花苷。用作强心剂。乌苯苷可用于研究钠-钾 ATP酶的特异性抑制剂(k-毒毛旋花苷也有效)，其强心作用也是基于此种抑制作用。乌苯苷 作为一种强心苷类化合物在自然界中广泛存在，在临床上主要用于治疗心衰和心律不齐。 常见的强心苷主要有地高辛、乌苯苷、夹竹桃苷和蟾毒灵几类。强心苷的作用位点为质膜 上的Na⁺-K⁺-ATPase(NKA)。对于乌苯苷的相关实验表明，乌苯苷对于机体免疫具有一定的 影响。

乌苯苷可以活化免疫细胞以及提高免疫细胞抵抗自身凋亡的能力，以此来消除癌细胞 产生的免疫抑制。然而，检索发现乌苯苷对肿瘤细胞中PD-L1的相关影响目前尚未见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种乌苯苷在制备下调肿瘤细胞PD- L1水平的制剂中的应用。

本发明所述乌苯苷在制备下调肿瘤细胞PD-L1水平的制剂中的应用。

其中：有效下调肿瘤细胞PD-L1水平的乌苯苷的浓度为100～200nmol/L。所述的肿瘤 为PD-L1受体天然高表达或因为肿瘤的治疗导致PD-L1受体高表达的肿瘤。

优选的，有效下调肿瘤细胞PD-L1水平的乌苯苷的浓度为200nmol/L。所述的肿瘤为非 小细胞肺癌。

本发明提供了一种针对PD-L1泛素化的调控方式，有助于进一步了解PD-L1有关的分 子机制，为设计相关药物提供理论依据。

本发明揭示了乌苯苷在抗肿瘤免疫反应中的潜力，为传统药物在肿瘤治疗领域中的二次 开发提供了一定的参考和启示。