[发明专利]一种长链烷烃降解菌及其应用

说明书

本发明涉及的是一种长链烷烃降解菌及其应用，这种长链烷烃降解菌通过以下方法制备：（1）菌种富集：（2）长链烃降解菌的分离：取连续富集培养的200μl富集培养液经梯度稀释后涂布在分离培养基上，稀释浓度梯度为10^‑1，10^‑2，10^‑3.....10^‑8，10^‑9，每个浓度涂布三个培养皿平行培养，于35℃恒温箱中倒置培养，待平板长出菌落后，根据菌落的形态、大小和颜色挑取不同的单菌落；（3）长链烷烃降解菌的纯化：取分离的单菌落，在分离培养基平板上采用划线法，于35℃恒温箱中倒置培养7d；如此反复转接三次，直至获得纯化的单菌落，得到长链烃降解菌。本发明降解长链烷烃的能力比较强，降解率可达到78%。

技术领域：

本发明涉及的是工业废水处理技术，具体涉及的是一种长链烷烃降解菌及其应用。

背景技术：

随着工业化技术的发展，含油废水、焦化废水、炼油废水、造纸废水等废水水质成分复杂，存在大量难生物降解成分，其中长链烷烃污染物可生化性差，处理较困难，生物强化技术通过投加目标污染降解菌加快这些有机污染物的降解速率。经水质分析表明，焦化废水中长链烷烃虽然含量不高，但却是水质达标的限速因素。通过色质联用技术（Gaschromatography-mass spectrometry，GC-MS）对原水和二沉池出水进行分析，结果表明长链烷烃类化合物穿透率较高，降解率较低，虽然含量不高，但对于出水COD的贡献较大，处理较困难。

焦化废水成分复杂，主要含酚、氰化物、苯、氨氮、焦油和硫化物等有毒有害物质，还含少量萘、吡啶、喹啉、吲哚、蒽、咔唑以及一些以盐类形式存在的无机物，很难被生物降解。焦化废水的可生化性较差，属较难生物降解工业废水。

由于煤制气废水含有高浓度的酚类化合物、难降解有机物和有毒污染物，国内外煤制气废水的治理技术普遍存在出水效果不理想、系统稳定性差和处理成本高等问题。通过色质联用技术（Gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）对原水和二沉池出水进行分析，结果表明长链烷烃类化合物穿透率较高，降解率较低，虽然含量不高，但却是水质达标的限速因素，对于出水COD的贡献较大，处理较困难。

发明内容：

本发明的一个目的是提供一种长链烷烃降解菌，这种长链烷烃降解菌用于工业废水中难降解烃类污染物的有效去除问题；本发明的另一个目的是提供这种长链烷烃降解菌的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：这种长链烷烃降解菌通过以下方法制备：

（1）菌种富集：

取10ml活性污泥加入装有100ml富集培养基的250ml三角瓶中，于35℃、180r/min的恒温摇床条件下培养7天，吸取5ml培养液转接至新鲜富集培养基中，于35℃、180r/min的恒温摇床条件下再培养7天，如此连续富集培养28天；

（2） 长链烃降解菌的分离：

取连续富集培养28天的200μl富集培养液经梯度稀释后涂布在分离培养基上，稀释浓度梯度为10^-1，10^-2，10^-3.....10^-8，10^-9，每个浓度涂布三个培养皿平行培养，于35℃恒温箱中倒置培养，待平板长出菌落后，根据菌落的形态、大小和颜色挑取不同的单菌落；

（3） 长链烷烃降解菌的纯化：

取分离的单菌落，在分离培养基平板上采用划线法，于35℃恒温箱中倒置培养7d；如此反复转接三次，直至获得纯化的单菌落，得到长链烃降解菌；

提取菌株的基因组DNA，利用通用引物8F和1492R对16SrDNA基因进行PCR扩增，测序后获得16SrDNA序列，经菌种鉴定，长链烃降解菌属于戈登氏菌属。

上述方案中活性污泥来自哈依煤气煤制气废水处理工艺二沉池。