[发明专利]一种同时检测三种猫腹泻病毒的三重PCR检测方法及其用途

说明书

本发明公开了一种同时检测三种猫腹泻病毒的三重PCR检测方法及其用途。本发明提供用于猫星状病毒、猫细小病毒、猫肠道冠状病毒检测的特异性引物，并建立了猫星状病毒、猫细小病毒、猫肠道冠状病毒的三重PCR检测方法。本发明的特异性引物和检测方法特异性强、灵敏度高、重复性和稳定性好，为猫腹泻性疾病的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异的临床检测方法。

技术领域

本发明属于病毒核酸检测领域，具体涉及一种同时检测三种猫腹泻病毒的三重PCR检测方法及其用途。

背景技术

猫的腹泻性疾病在临床多发，其中以传染性病原引起的临床症状最为严重，尤其是以猫泛白细胞减少症病毒(Feline parvovirus，FPV)为代表的肠道病毒是引起幼年猫发病死亡的主要原因。除了FPV，病毒宏基因组学研究结果表明猫粪便样本中也存在猫星状病毒(Feline astrovirus，FAstV)、猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus，FECoV)以及其他多种肠道病毒混合感染的情况，这可能是决定临床抗病毒治疗效果和预后的影响因素。

猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)又称猫泛白细胞减少症病毒、猫瘟热病毒或猫传染性肠炎病毒。病毒的基因组包含编码非结构蛋白(NS)和结构蛋白(VP1与VP2)等4个编码基因的开放性阅读框(ORF)，VP基因易发生重组变异。猫感染细小病毒后的临床表现为高热、呕吐、腹泻和肠炎，能够导致白细胞数目严重减少。该病毒主要感染猫科与鼬科等多种动物，尤其以6月龄以下幼小动物的发病率和死亡率更高，是目前肉食兽细小病毒属中感染范围最广、致病性最强的一种病毒。

FAstV为哺乳动物星状病毒属的无包膜单股正链RNA病毒，包含编码开放性阅读框(ORF)1a、1b和核衣壳蛋白(N)3个编码基因的序列，其中ORF1序列显示出了明显的基因多态性。该病毒与人的星状病毒在进化关系上相近，因此，在共居环境中，人与猫的频繁接触可能会增加交叉感染的风险。

FECoV为冠状病毒属的单股正链RNA病毒，包括ORF1a、ORF1b、纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)、非结构蛋白(N)等6个编码基因序列。猫单一感染FECoV后通常无明显临床症状。感染猫康复后仍有感染风险，并隐性带毒，是导致该病毒持续传播和流行的主要原因之一。当FECoV的S和3c基因突变时，Ⅰ型FECoV可能转变为具有强致病性的Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)。

目前对FPV的分子检测方法十分成熟，但对其他肠道病毒的临床检测仍然缺乏高效的方法，目前国内也尚未有同时检测FPV/FAstV/FECoV的分子检测方法。因此，若能开发出一种能够同时检测多种猫腹泻病毒感染的三重PCR检测方法，将有助于提升猫腹泻病毒检测水平，在疾病诊断和防治等方面具有重要的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测三种猫腹泻病毒的三重PCR检测方法，能够同时检测猫星状病毒(FAstV)、猫细小病毒(FPV)、猫肠道冠状病毒(FECoV)。

本发明的目的通过以下方案实现：

提供一种同时检测三种猫腹泻病毒的引物组合，包括FAstV、FPV和FECoV的检测引物，具体引物序列如下：

FAstV-F：5’-CTGGAAGAGCTATGACACCATTG-3’，

FAstV-R：5’-CCATGAACGCAGAGAGCAAC-3’；

FPV-F：5’-TGGTTCTGGGGGTGTGGG-3’，

FPV-R：5’-GCTGCTGGAGTAAATGGC-3’；

FECoV-F：5’-CCAAAAGACGTGGTCGTTCTAA-3’；

FECoV-R：5’-GTTTTCTTCCAGGTGTGTTTGT-3’。