[发明专利]从FFPE样本中快速提取核酸的试剂、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种从FFPE样本中提取核酸的试剂，其特征在于：所述试剂包括结合缓冲液，所述结合缓冲液包括以下组分：胍盐1-5M，吐温系列表面活性剂0.1-2%（v/v），聚乙二醇辛基苯基醚1-5%（v/v），乙二胺四乙酸10-40mM，Tris-HCl 20-60mM，聚乙二醇0.1-2%（w/v），十二烷基硫酸根离子沉淀剂0.1-2M，pH值为8.0-9.5；

所述胍盐为盐酸胍或异硫氰酸胍；

所述吐温系列表面活性剂为吐温20或吐温40；

所述聚乙二醇的分子量为6000-8000；

所述十二烷基硫酸根离子沉淀剂为氯化钾或氯化锶；

所述试剂还包括脱蜡剂、裂解缓冲液、蛋白酶、磁珠、核酸助沉剂、洗涤缓冲液和洗脱缓冲液；

所述裂解缓冲液由以下组分组成：十二烷基硫酸钠10-50mM，吐温20或吐温40 0.1-1%（v/v），Tris-H₂SO₄10-50mM，pH值为7.5-10.0；

所述洗涤缓冲液包括洗涤缓冲液I和洗涤缓冲液II，所述洗涤缓冲液I由以下组分组成：胍盐1mM-5M，Tris-HCl 10-60mM，乙醇或异丙醇40-80%（v/v），pH值为4.0-8.0；所述洗涤缓冲液II由以下组分组成：Tris-HCl 10-60mM，乙醇或异丙醇60-90%（v/v），pH值为7.0-10.0，余量为水；

所述洗脱缓冲液为TE缓冲液，组成为：Tris-HCl 10mM，乙二胺四乙酸1mM，pH值为8.0-9.5。

2.根据权利要求1所述的从FFPE样本中提取核酸的试剂，其特征在于：所述磁珠选自硅羟基磁珠、羧基修饰磁珠中的任意一种，表面无孔或多孔；

所述核酸助沉剂选自C1-C5的一元醇、C1-C9的多元醇中的一种或多种；所述C1-C5的一元醇选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、戊醇中的一种或多种；所述C1-C9的多元醇选自2-甲基-1,3-丙二醇、2,3-丁二醇、1,2-丙二醇、三丙二醇中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的从FFPE样本中提取核酸的试剂，其特征在于：所述试剂还包括甲醛清除剂、解交联试剂中的一种或多种；

所述脱蜡剂选自萜烯油、矿物油、C7-C10的直链/支链烷烃或其混合物、柠檬精油、6-溴己基乙酸酯、C10-C16的直链/支链/环状烷烃或其混合物、聚有机硅氧烷脱蜡剂中的一种或多种；

所述甲醛清除剂选自己二酸二酰肼、琥珀酸二酰肼中的一种或多种；

所述解交联试剂选自乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、2-氨基-1,3-丙二醇、氨基胍中的一种或多种。

4.一种从FFPE样本中提取核酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括包含如权利要求1所述试剂的容器，具体为：

包含脱蜡剂的容器；

包含裂解缓冲液的容器；

包含蛋白酶的容器；

包含结合缓冲液的容器；

包含磁珠的容器；

包含核酸助沉剂的容器；

包含洗涤缓冲液的容器；

包含洗脱缓冲液的容器。

5.根据权利要求4所述的从FFPE样本中提取核酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括以下一个或多个容器：

包含甲醛清除剂的容器；

包含解交联试剂的容器。