[发明专利]一种模拟养殖场区利用噬菌体抑制巴氏杆菌的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种模拟养殖场区的利用噬菌体抑制巴氏杆菌的效果评价方法。本发明评价方法建立了菌液OD600与菌量、菌液用量及噬菌体效价之间的关系，可保证菌液用量满足噬菌体效价的测定，评价结果稳定且可信度高，可用于指导养殖者选择适宜的噬菌体和适宜浓度的抗生素联用，进行科学养殖，进而有效地抑制养殖过程中病原菌的生长，大大降低了人力成本，显著提高了经济效益。

技术领域

本发明涉及养殖技术领域，尤其涉及一种模拟养殖场区利用噬菌体抑制巴氏杆菌的方法。

背景技术

细菌病是导致动物养殖业经济损失一直居高不下的主重要原因，尤其是生猪养殖业，生产上可造成较大损失的常见猪病就有16种以上，如巴氏杆菌病(Pasteurellosis)、链球菌病(Streptococcosis)、大肠杆菌病(Colibacillosis)、梭菌病(Clostridiosis)以及放线杆菌病(Actinobacillosis)等；其中，猪巴氏杆菌病又名猪肺疫、猪出血性败血症、肿脖瘟、锁喉风，是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida，Pm)引起的一种急性传染病。该病一年四季均可发生，多见于保育猪和育肥猪，可引起猪萎缩性鼻炎、肺炎和败血症等。通常情况下，用于巴氏杆菌病治疗的药物包括头孢噻呋、恩氟沙星、托拉菌素，但长期使用抗生素导致了耐药性的产生，给疾病防控带来更大的难度。随着疫苗的研发和问世，一些添加PMT类毒素的疫苗能够提供较好的免疫保护；

噬菌体作为一种能够寄生在细菌上的病毒，可特异性的侵染细菌，并利用细菌体内的物质完成自身的增殖，最终导致细菌裂解死亡；鉴于噬菌体具有特异性强、自我增殖快、繁殖能力强等优点，且噬菌体会随着宿主的死亡而死亡，对人和动物细胞无毒，所以噬菌体在治疗细菌性疾病方面具有得天独厚的优势，利用噬菌体治疗细菌性疾病越来越受到人们的关注，在生猪养殖场的使用量也越来越高。噬菌体治疗单一细菌性疾病时，是以噬菌体为主要成分进行实践的，根据剂型及使用方法的不同，即可用于预防，也可用于治疗。

目前尚无噬菌体抗菌治疗的应用规范，更缺乏噬菌体在生猪养殖场的应用剂量评估方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种模拟养殖场区利用抑制巴氏杆菌的方法。本发明在实验室模拟场区环境，采用高效简便的方法对巴氏噬菌体的应用剂量和使用周期进行了探究，对后续的动物实验和生产实践具有重要的参考意义。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种模拟养殖场区利用噬菌体抑制巴氏杆菌的方法，包括：

步骤1：将纱布清洗、灭菌、干燥后，平铺于培养皿中间；

步骤2：制备浓度为1×10⁵CFU/mL～1×10⁹CFU/mL的巴氏杆菌菌液和浓度为8×10⁵PFU/mL～8×10⁶PFU/mL的巴氏噬菌体溶液；

步骤3：将1ml所述巴氏杆菌菌液和1ml所述巴氏噬菌体溶液滴加到所述纱布上，密封，30℃恒温、静置培养；

步骤4：制备固体平板；将所述静置培养后的培养液滴加到所述固体平板上平板表面，晾干，倒置，37℃恒温、静置培养8～10h后统计菌落个数。

一些实施方案中，所述灭菌为120℃高压湿热灭菌40min。

一些实施方案中，所述干燥为80℃烘干箱中烘干。

一些实施方案中，所述纱布的尺寸为2cm×2cm。

一些实施方案中，所述巴氏杆菌菌液由以下方法制得：

取巴氏杆菌甘油菌，加入含5％马血清的TSB培养基，37℃恒温，145rpm振荡培养12～13小时。