[发明专利]用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其19-plex快速分型检测方法

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其19‑plex快速分型检测方法。本发明使用国际通用微卫星标记结合多重PCR技术,研发了一套马个体识别和亲子鉴定快速检测方法。包括：确定马的18个微卫星位点和1个性别鉴定位点并将所述18对微卫星引物和1对性别鉴定位点引物合成19对荧光标记引物、PCR扩增得到18条目标微卫星序列和1个性别鉴定位点序列及检测结果分析步骤。本发明可实现一次PCR反应即获得18个马微卫星标记的分型结果，同时鉴定性别，扩增结果稳定且具有良好的灵敏度，可用于马的个体识别、亲子鉴定以及基于微卫星标记的群体遗传学研究。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及荧光多重PCR技术和微卫星基因分型技术，具体为用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组19-plex快速检测方法。

背景技术

基于微卫星标记(Short tandem repeat,STR)的个体识别技术是人和动物亲子鉴定的主要检测手段，也是分析群体遗传结构、探究群体间遗传进化关系的常用数据收集方法。应用个体识别技术确定亲子关系，建立精准繁育记录，是保障马、驴产业可持续性发展的重要手段；收集个体识别信息进行群体遗传学研究，对马、驴地方品种的选育和开发具有重要意义。

国际上常用的马个体识别标记为国际动物遗传学学会(International Societyfor Animal Genetics,ISAG)推荐的17个微卫星位点(AHT4，HMS1，CA425，HTG10，ASB23，HMS3，HMS6，HTG4，HMS7，ASB2，HMS2，VHL20，LEX3，AHT5，ASB17，HTG7，HTG6)和澳大利亚马会选用的LEX33位点。目前，尚无检测方法可以通过一次PCR反应快速获取以上18个微卫星位点的分型结果同时鉴定性别。

发明内容

针对上述存在的技术问题，本发明的目的在于：采用ISAG推荐的17个微卫星标记和澳大利亚选用的微卫星位点LEX33，应用多重PCR技术，提供一套用于马快速个体识别和亲子鉴定的检测方法。该方法只需一次PCR反应即可完成以上18个马微卫星标记的基因分型同时鉴定样品性别，本检测方法检测效率高、效果稳定，适于推广应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组，由18对微卫星引物序列和1对性别鉴定引物序列构成，具体引物序列及其所携带的荧光标记为：

微卫星位点AHT4，引物序列F:AACCGCCTGAGCAAGGAAGT，R:GCTCCCAGAGAGTTTACCCT；产物范围144-164bp，引物终浓度80nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点HMS1，引物序列F:GGATACACATTTCACTTTAGCCG，R:CATTTATCATCATCTGATATGCTCTG；产物范围188-204bp，引物终浓度145nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点CA425，引物序列F:AGCTGCCTCGTTAATTCA，R:CTCATGTCCGCTTGTCTC；产物范围226-246bp，引物终浓度165nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点HTG10，引物序列F:ATTGGGCTTTTTATTCTGATCTGTC，R:CCCTCTGTCTATTTCTCATTTCTGG；产物范围282-306bp，引物终浓度120nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点ASB23，引物序列F:GCCTTTATCTCCCCTTTTCAAC，R:GAAAGTCTTGGTTTTGGCATTG；产物范围344-380bp，引物终浓度133nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点HMS3，引物序列F:TCAGATAGTGATAATGCCGTGG，R:GCTCTAAAGCCCCAACTCTTTG；产物范围438-460bp，引物终浓度120nM/L，携带标记为FAM；