[发明专利]用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其15-plex快速分型检测方法

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其15‑plex快速分型检测方法。本发明选用15个四碱基重复微卫星标记结合多重PCR技术,研发了一套猫个体识别和亲子鉴定快速检测方法。包括：确定猫的14个微卫星位点和1个性别鉴定位点并将所述14对微卫星引物和1对性别鉴定位点引物合成15对荧光标记引物、PCR扩增得到14条目标微卫星序列和1个性别鉴定位点序列及检测结果分析步骤。本发明可实现一次PCR反应即获得14个猫四碱基微卫星标记的分型结果，同时鉴定性别，扩增结果稳定且具较高的灵敏度，可用于猫的个体识别和亲子鉴定。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及多重PCR技术和微卫星分型技术，具体为用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其15-plex快速分型检测方法。

背景技术

微卫星标记作为一种DNA分子标记技术，具有操作简便、准确性高，成本较低等优点，被广泛应用于分析种群遗传多样性、个体识别和亲子鉴定中。因为四碱基重复的微卫星标记具有比两碱基重复标记更好的准确性和灵敏度，所以在人、犬、猫等动物的个体识别和亲子鉴定中被广泛应用。

国际上常用的猫个体识别标记为国际动物遗传学学会(International Societyfor Animal Genetics,ISAG)推荐的14个四碱基重复微卫星位点(F27、F37、F42、F141、FCA441、FCA559、FCA730、FCA733、FCA734、FCA740、FCA742、FCA744、FCA747、FCA749)。目前，我国尚无可通过一次PCR反应快速获取以上14个微卫星位点的分型结果，同时鉴定性别的检测方法。仅能每个位点单独检测，试验效率低下、检测成本高昂。

发明内容

针对上述存在的技术问题，本发明的目的在于：采用ISAG推荐的14个四碱基重复微卫星标记，应用多重PCR技术，提供一套用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其15-plex快速分型检测方法。该方法只需一次PCR反应即可完成以上14个猫微卫星标记的基因分型同时鉴定样品性别。本检测方法检测效率高、效果稳定，适于推广应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组,其特征在于，由14对微卫星引物序列和1对性别鉴定引物序列构成，引物序列及其所携带的荧光标记为：

微卫星位点FCA559，引物序列F:TGTTCAAGAGTGGTTATCACTAG，R:GTAAGTTTTGGCTTGATGAG；产物范围211-239bp，引物终浓度180nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点FCA747，引物序列F:AAGAAACTTCATACCCATTAGC，R:TCTGATATTCTCCTCAATGATG；产物范围188-204bp，引物终浓度145nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点FCA740，引物序列F:CCACAGGTAAACATCAACC，R:ACATCTCCACATCTGTAGCC；产物范围249-268bp，引物终浓度110nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点F27，引物序列F:CAGACTACTTTAGGTGCTACAAG，R:AAAGTTTAGAACTGATGTCTTTG；产物范围351-435bp，引物终浓度280nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点F37，引物序列F:TCTCACATTACCATTCATCC，R:GGCTGGAAATAAGATTTGG；产物范围453-479bp，引物终浓度750nM/L，携带标记为FAM；

微卫星位点FCA742，引物序列F:GTCTTGACAACGCATAAGAAC，R:ACCAGGAACACCATGTTG；产物范围114-160bp，引物终浓度130nM/L，携带标记为HEX；