[发明专利]重组真菌免疫调节蛋白rFIP-glu的应用

说明书

一种重组真菌免疫调节蛋白rFIP‑glu的应用，将其用于制备药妆面膜，从而降低细胞中黑色素含量和促进人角质形成细胞的细胞增殖。通过基因工程构建的重组灵芝免疫调节蛋白rFIP‑glu在毕赤酵母真核表达系统中进行表达并纯化，给药于小鼠黑色素瘤细胞B16和人角质形成细胞Hacat，结果显示重组灵芝免疫调节蛋白rFIP‑glu能够抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的生长，促进人角质形成细胞Hacat细胞的生长；在6μg/mL～48μg/mL范围内能降低B16细胞中的黑色素含量，在48μg/mL的高浓度下rFIP‑glu可以显著抑制B16细胞酪氨酸酶的活性，并对黑色素合成相关通路基因的表达产生一定影响。

技术领域

本发明涉及的是一种生物工程领域的技术，具体是一种重组灵芝真菌免疫调节蛋白(recombinant FIP-glu，rFIP-glu)在药物化妆品领域的应用。

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)具有滋补强本、固本扶正、养颜安神等功效，其药物疗效逐渐被学者们重视。灵芝中含有多种有效的生物活性成分，包括灵芝多糖、灵芝多肽、灵芝三萜类化合物、蛋白质、氨基酸、微量元素、萜烯酮醇、过氧化麦角甾酵、甘露醇、甾醇、生物碱等。目前，化妆品市场上出现了众多以灵芝为主要添加物的化妆品产品，在化妆品中添加适量的灵芝活性成分正在成为化妆品开发的热点。现有的众多化妆品品牌已经开始利用灵芝提取液进行化妆品开发，多用赤芝或黑灵芝子实体提取物进行开发，添加形式均为子实体提取物，提取效率比较低，导致成本较高以及产品中灵芝提取物添加量偏少，发挥作用有限(王倩,张佳婵,王昌涛,等.灵芝美容护肤作用机制及其在化妆品行业中的发展现状.日用化学工业,2019,049(002):118-125.)。灵芝蛋白种类多样并具有的丰富的生物学功能，其中灵芝真菌免疫调节蛋白(fungal immunomodulatoryprotein from Ganodermalucidum，FIP-glu)是灵芝蛋白中研究最多，功能相对比较清晰的一种蛋白，灵芝本身该蛋白的含量就比较低，例如，300g湿重的灵芝菌丝体中仅能分离出约5-10mg纯FIP-glu；而编码灵芝蛋白基因的核苷酸序列已经非常清楚，若使用基因工程构建灵芝蛋白工程菌来生产灵芝蛋白，再进行化妆品生产，可以有效减少生产成本。至今为止，编码FIPs的基因在原核生物和真核生物中都得到了成功表达，在植物、酵母、昆虫细胞中均有FIPs表达的相关报道，表达量从6.25～191.2mg/L不等。目前在真菌免疫调节蛋白重组表达中所用的毕赤酵母多为GS115菌株，不同基因来源、相同基因来源、不同基因结构以及不同表达形式等，均会对FIPs的表达量产生较大的影响，要获得一株高产FIPs的酵母转化子，并非是一件容易的事，需要考虑基因结构、启动子、载体等多种因素(WangXF,Su KQ,Bao TW,Cong WR,Chen YF,LiQZ,Zhou XW.Immunomodulatory effects of fungal proteins.Current TopicsinNutraceuticalResearch.2012,10(1):1-11)。

现有文献分析发现，灵芝化妆品作为一种具有开发潜力和功效性质的化妆品，已经引起了化妆品行业的广泛关注，目前灵芝化妆品的功效性研究主要都集中在抗衰老和抗氧化方面，对其他功效的研究和应用较少，扩大灵芝化妆品功效的研究范围是重要的研究方向。此外，目前灵芝活性成分研究主要集中在灵芝多糖和三萜类成分方面，对其他功效成分，例如多肽、蛋白质的研究应用较少(Zhou XW,Su KQ,Zhang YM.Applied modernbiotechnology for cultivation ofGanoderma and development oftheir products.AppliedMicrobiologyandBiotechnology.2012,93(3):941-963.)，加大对灵芝其他生物活性成分的研究可以进一步拓宽灵芝在化妆品中的应用。