[发明专利]一种HAT半固体筛选培养基及其批量生产设备

说明书

本发明公开了HAT半固体筛选培养基及其批量生产设备，每90ml所述HAT半固体筛选培养基包括:1.5‑2.5ml的50×HAT贮存液,16‑24ml的胎牛血清,0.7‑1.2ml的细胞用抗生素，7‑12ml的Hybridoma Feeder溶液,余量的甲基纤维素半固体培养基，一种HAT半固体筛选培养基的批量生产设备，包括容纳组件和搅拌组件，所述容纳组件包括圆筒，所述圆筒横向放置，所述圆筒上侧开设有进料口，所述进料口一侧设置有进料门；所述圆筒下侧固定连接有支腿。本发明可在融合后同步完成杂交瘤细胞筛选和亚克隆过程，缩短实验周期，减少实验工作量及失败几率；相比液体培养方法，可以减少非目标融合细胞过度生长导致的分泌抗体细胞的丢失。

技术领域

本发明涉及细胞技术领域，具体涉及一种HAT半固体筛选培养基及其批量生产设备。

背景技术

单克隆抗体技术的基本原理是将分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养的骨髓瘤细胞进行杂交，筛选得到的杂交瘤细胞既能分泌抗体又有骨髓瘤细胞无限增殖的特性，由一个杂交瘤细胞繁殖、分泌的抗体称为单克隆抗体，它只针对一个抗原表位。细胞融合时，B细胞是从抗原免疫的动物的脾脏中分离出来的，骨髓瘤细胞是经过诱变和筛选得到的缺陷型，其本身不能分泌抗体。

在融合后的细胞群中，未融合的脾细胞和相互融合的脾细胞，不能连续培养，只能在培养基中存活几天，而未融合的骨髓瘤细胞和融合的骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT不能在HAT培养基中存活，只有骨髓瘤细胞与脾细胞形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基中存活下来，所以杂交瘤能正常地生长繁殖而被选择出来。

一个脾脏中，能分泌抗体的细胞占的比例很少，90％以上的细胞是不能分泌抗体的。即使进行了人工免疫，能分泌出针对人工免疫的抗原的抗体的细胞比例也是很低的，并且两个细胞的融合是随机的，因此，尽管一个成功免疫的脾脏可达到2×10个细胞以上，但细胞融合后能得到目标杂交瘤的数量也是很有限的，在筛选克隆出这些能分泌目的抗体的杂交瘤细胞时实验周期长，工作量大，失败率较高，培养规模不易扩大。

配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化，并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。但是，桶状的混匀装置不便于出料。

发明内容

本发明的目的在于提供一种HAT半固体筛选培养基及其批量生产设备，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种HAT半固体筛选培养基：

每90ml所述HAT半固体筛选培养基包括:1.5-2.5ml的50×HAT贮存液,16-24ml的胎牛血清,0.7-1.2ml的细胞用抗生素，7-12ml的Hybridoma Feeder溶液,余量的甲基纤维素半固体培养基。

在本发明的一种实施例中，所述细胞用抗生素设置为100×青霉素和链霉素的双抗溶液。

在本发明的一种实施例中，所述细胞用抗生素由一份100×青霉素和链霉素的双抗溶液和一份庆大霉素构成。

100×青霉素和链霉素的双抗溶液主要针对革兰氏阳性菌、阴性菌；

庆大霉素即可抑制真菌又可抑制支原体污染。

在本发明的一种实施例中，所述甲基纤维素半固体培养基中加入DEME细胞培养基的溶解液；

DEME细胞培养基的溶解液由两份质量的粉末状DEME细胞培养基和一份质量的无菌水混合而成；

所述甲基纤维素半固体培养基和所述DEME细胞培养基的溶解液的质量比为8:2。