[发明专利]一种复制缺陷型耐药流感病毒及其核酸节段重组率检测方法

权利要求书

1.一种复制缺陷型耐药流感病毒（DRRIV），其是通过反向遗传学操作拯救产生的流感病毒，包括耐药突变以及PTC突变；

其中，所述耐药突变选自NA蛋白H274Y+ NA蛋白N294S、NA蛋白H274Y+ NA蛋白R292K、NA蛋白E119V +NA蛋白H274Y、NP蛋白Y289H、PA蛋白I38T、NA蛋白H274Y或NA蛋白N294S，所述PTC突变导致DRRIV在天然宿主细胞中无法增殖和传代；

PTC突变是在NA蛋白第28位突变为终止密码子。

2.如权利要求1所述复制缺陷型耐药流感病毒，其特征在于耐药突变为NA蛋白H274Y、PTC突变为NA蛋白第28位的密码子突变为TAG。

3.一种可视化标记的流感病毒，其特征在于，所述流感病毒为如权利要求1-2中任一项所述复制缺陷型耐药流感病毒，采用3种蛋白定点标记技术对流感病毒的多种结构蛋白进行标记；所述3种蛋白定点标记技术分别利用FIAsH-EDT2对四半胱氨酸序列（CCXXCC）、Sortase A酶对5×Gly序列、Sfp合成酶对ybbR序列（DSLEFIASKLA）的特异性识别进行蛋白质标记；

通过反向遗传操作将四半胱氨酸序列（CCXXCC）编码核酸插入NP蛋白编码区和M1蛋白编码区、将5×Gly序列编码核酸插入HA蛋白编码区、将ybbR序列（DSLEFIASKLA）插入NA蛋白编码区和M2蛋白编码区。

4.流感病毒重组率的检测方法，其特征在于将未标记流感病毒与权利要求3所述可视化标记的流感病毒共感染宿主细胞，通过检测重组子代可视化信号比例，分析计算流感病毒重组率。

5.一种组合物，其包括

（1）权利要求1-2中任一项所述复制缺陷型耐药流感病毒；

（2）可选的，药学上可接受的载体和/或辅料；

（3）可选的，有效量的流感病毒抑制剂；

其中，所述流感病毒抑制剂选自NA抑制剂奥司他韦（Oseltamivir）、扎那米韦（Zanamivir），PA抑制剂巴洛沙韦（Baloxavir），NP抑制剂Nucleozin。

6.权利要求1-2中任一项所述复制缺陷型耐药流感病毒、或权利要求5所述组合物在制备预防和治疗流感病毒感染的药物中的应用；

其中，所述流感病毒感染包括耐药流感病毒感染和不耐药流感病毒感染。