[发明专利]一种用于检测T-2毒素的turn-on型试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测T-2毒素的turn-on型试纸条，由PVC底板、样品垫、吸收垫和硝酸纤维素膜组成，其特征在于，以时间分辨荧光微球标记BSA牛血清白蛋白复合物作为荧光供体，以胶体碳标记抗体复合物作为猝灭剂；

所述时间分辨荧光微球标记BSA牛血清白蛋白复合物为BSA加入到活化的时间分辨荧光微球中，室温孵育，得到；

所述胶体碳标记抗体复合物为T-2毒素的单克隆抗体与胶体碳溶液混匀，室温反应；加入BSA牛血清白蛋白溶液，室温封闭，经离心，弃上清，复溶，得到。

2.制备如权利要求1所述的用于检测T-2毒素的turn-on型试纸条的方法，其特征在于，方法如下：

（1）清洗时间分辨荧光微球：用pH 6.0 MES缓冲液稀释时间分辨荧光微球，混匀后，离心，弃上清，沉淀，按相同的步骤再次洗涤，将其重悬于pH 6.0 MES缓冲液中；

（2）活化时间分辨荧光微球：在步骤（1）所得的溶液中依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温孵育，然后将活化的时间分辨荧光微球离心，弃上清，将沉淀重悬于pH 6.0 MES缓冲液中；

（3）制备时间分辨荧光微球标记BSA牛血清白蛋白：将BSA牛血清白蛋白加入到活化后的时间分辨荧光微球中，室温孵育，得到时间分辨荧光微球标记BSA牛血清白蛋白复合物；

（4）清洗：将步骤（3）制备的时间分辨荧光微球标记BSA牛血清白蛋白复合物溶液经过离心，弃上清，加入到pH 7.4 PBS缓冲液重悬，再重复一次离心，弃上清，最终重悬于pH 7.4PBS缓冲液；

（5）制备胶体碳标记抗体复合物：将T-2毒素的单克隆抗体与胶体碳溶液混匀，室温反应；加入BSA牛血清蛋白溶液，室温封闭，将封闭后的混合液离心，弃上清，复溶，得到胶体碳标记抗体复合物；

（6）组装turn-on型侧流层析检测试纸条：将硝酸纤维素膜粘贴到底板中间，在NC膜上喷涂时间分辨荧光微球标记BSA牛血清白蛋白复合物和T-2抗原的混合物作为检测线，喷涂羊抗鼠IgG抗体作为质控线，置于烘箱中干燥，然后分别将吸收垫和样品垫粘贴在底板两端，最后将组装好的试纸条切条，密封干燥保存。

3.根据权利要求2所述的用于检测T-2毒素的turn-on型试纸条的制备方法，其特征在于，步骤（3）中时间分辨荧光微球和BSA牛血清白蛋白的体积质量比为0.1mL:4mg。

4.根据权利要求2所述的用于检测T-2毒素的turn-on型试纸条的制备方法，其特征在于，步骤（5）中0.11 mg/mL的T-2单克隆抗体与1×胶体碳溶液的体积比为50 μL：1 mL。

5.根据权利要求2所述的用于检测T-2毒素的turn-on型试纸条的制备方法，其特征在于，以时间分辨荧光微球的添加量计算，步骤（6）中所述时间分辨荧光微球标记BSA牛血清白蛋白复合物和T-2抗原的混合物中时间分辨荧光微球标记BSA复合物的浓度为TRFM-BSA0.03 μg/mL；T-2抗原的浓度为0.9 mg/mL，混合物的喷量为0.8 μL/cm；所述羊抗鼠IgG抗体浓度为0.67 mg/mL，喷量为0.8 μL/cm。