[发明专利]CCR8基因人源化非人动物及其构建方法和应用

说明书

本发明提供了一种CCR8基因人源化的非人动物的构建方法、一种人源化CCR8蛋白、一种人源化CCR8基因、一种CCR8基因的靶向载体和其在生物医药领域的应用，利用同源重组的方式将编码人CCR8蛋白的核苷酸序列导入非人动物基因组中，该动物体内能正常表达人或人源化CCR8蛋白，可以作为人CCR8信号机理研究、炎症、肿瘤或自身免疫性疾病药物筛选的动物模型，对免疫靶点的新药研发具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及一种CCR8基因人源化的非人动物及其构建方法和在生物医药领域的应用。

背景技术

CCR8是一种CC类趋化因子受体，属于G蛋白偶联受体。该基因主要表达在淋巴器官的免疫细胞中，具体表达在Treg细胞、TH2细胞、单核细胞和NK细胞中。初期研究表明趋化因子CCL1为CCR8的唯一配体(CCR8也为CCL1的唯一受体)，但是后来也有报道人源CCL18(对应小鼠功能上的同源基因CCL8)也是CCR8的配体之一。

CCR8主要表达在Treg细胞中，对Treg细胞介导的免疫抑制功能具有重要作用。研究表明乳腺癌、结肠癌和肺癌等病人组织中的tumor-resident Treg细胞中的CCR8要比正常组织Treg细胞中的CCR8呈显著的增加表达以及在外周血Treg中可以忽略的表达，重要的是CCR8在肿瘤中的效应免疫细胞中都没有检测到表达，包括αβT细胞、NK细胞和γδT细胞以及髓样细胞，只是NKT细胞有降低50％的表达；同时tumor-resident Treg细胞中的CCR8的表达量与临床表现也具有很紧密的关联，表现在不因乳腺癌的亚型而变化，以及CCR8和Foxp3同时高表达的病人会出现disease free和overall survival的明显下降，这表明可能用抗体靶向CCR8蛋白可以有效的选择性耗尽tumor-resident Treg细胞，从而使免疫细胞更容易攻击肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的效果。此外，CCR8还选择性地表达在TH2细胞、单核细胞和NK细胞中，主要通过诱导炎症细胞迁移，参与各种炎症性疾病。

鉴于CCR8可能在肿瘤疾病治疗中起着重要作用，为进一步的研究相关的生物学特性，提高临床前期的药效试验的有效性，提高研发成功率，使临床前期的试验更有效并使研发失败最小化，本领域亟需开发涉及CCR8信号通路的非人动物模型。

发明内容

本发明的第一方面，提供了一种CCR8基因人源化的非人动物，所述的非人动物体内表达人或人源化CCR8蛋白。

优选的，所述的非人动物的内源CCR8蛋白表达降低或缺失。

优选的，所述的人源化CCR8蛋白包含人CCR8蛋白的全部或部分。

优选的，所述的人源化CCR8蛋白包含人CCR8蛋白的跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分。

进一步优选的，所述的人源化CCR8蛋白包含人CCR8蛋白的跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部。

优选的，所述的人源化CCR8蛋白包含跨膜区、胞质区和胞外区，其中，所述的人源化CCR8蛋白包含与SEQ ID NO:2具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的氨基酸序列或者包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列。

优选的，所述的人源化CCR8蛋白包含人CCR8基因的1号至2号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分,进一步优选的，所述的人源化CCR8蛋白包含人CCR8基因的2号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分；更优选的，包含从人CCR8基因的起始密码子至终止密码子编码的氨基酸序列。

优选的，所述的人源化CCR8蛋白至少包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:10编码的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:10编码的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的氨基酸序列。