[发明专利]一种人巨细胞病毒重组抗原的纯化方法在审
| 申请号： | 202111065329.2 | 申请日： | 2021-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN113788880A | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 李永刚;李伟;张婉君;张杰 | 申请（专利权）人： | 南京珀尔泰生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/045 | 分类号： | C07K14/045;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/14 |
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| 地址： | 210000 江苏省南京市栖霞*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 巨细 病毒 重组 抗原 纯化 方法 | ||
1.一种人巨细胞病毒重组抗原的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤（1）、将含有重组表达的人巨细胞病毒重组抗原菌体沉淀放入平衡缓冲液中搅拌，菌体重悬均匀后进行超声破碎，超声破碎后的破碎液经离心后，收集上清液；
步骤（2）、将步骤（1）中得到的上清液进行滤器过滤处理；
步骤（3）、将步骤（2）中过滤处理后的上清液上样到亲和层析柱，经过洗涤步骤去除杂蛋白，再采用解离液洗脱得到含有目的蛋白的洗脱峰；
步骤（4）、将步骤（3）中得到的洗脱缓冲液透析于保存缓冲液中，进行后续的分析鉴定。
2.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒重组抗原的纯化方法，其特征在于，所述步骤（1）中，超声破碎功率200W，超声破碎99次，每次超声破碎时间4s，相邻两次超声破碎间隔8s；离心转速为15000 rpm，离心时间为30 min，离心在4℃下进行。
3.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒重组抗原的纯化方法，其特征在于，所述步骤（2）中，使用滤器过滤的过滤孔径为0.45μm。
4.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒重组抗原的纯化方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述亲和层析柱为GST标签蛋白纯化柱，洗脱液为50 mM Tris+10 mM GSH，pH 8.0。
5.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒重组抗原的纯化方法，其特征在于，所述步骤（4）中，透析采用的透析袋截留分子量8 kD-14 kD，缓冲液为10 mM PBS+20%甘油，pH7.4。
6.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒重组抗原的纯化方法，其特征在于，所述步骤（1）中，含有重组表达的人巨细胞病毒重组抗原菌体沉淀的制备方法，包括以下步骤：
步骤（11）、将含有GST-pp150目的基因的表达载体转化到大肠杆菌中，放大培养含有基因的大肠杆菌，利用IPTG诱导蛋白表达，菌液离心后，收集菌体沉淀。
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