[发明专利]猪圆环病毒2型、3型、4型现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了猪圆环病毒2型、3型、4型现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒及其使用方法，包括多个扩增检测管，所述扩增检测管预装检测试剂和冻干保护剂，所述扩增检测管的管盖采用熔点56～58℃石蜡预包埋pH指示剂；以具有致病性的PCV2型、3型和4型为研究对象，开发出一种针对不同基因型PCV的现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒，实现PCV 2型、3型和4型的快速鉴别诊断。

技术领域

本发明涉及猪圆环病毒检测技术领域，具体为猪圆环病毒2型、3型、4型现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒及其使用方法。

背景技术

猪圆环病毒(Porcine circoviruses,PCVs)是一种环状、无囊膜的DNA病毒，属于圆环病毒科，圆环病毒属的成员。目前已鉴定出四种PCV，包括PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。PCV1无致病性，PCV2被认为是猪圆环病毒相关疾病(porcinecircovirus-associateddiseases,PCVAD)的病原体。PCV3与生殖障碍、猪皮炎和肾病综合征(porcine dermatitisand nephropathy syndrome,PDNS)以及多系统炎症有关。PCV4检自出现PDNS、呼吸道和肠道症状的病猪。目前，我国猪群中PCV的感染状况十分复杂，同一猪体内可能存在不同类型的PCV混合感染。因此，PCV的快速鉴别检测对相关疾病的临床治疗至关重要。

由于PCV3和PCV4在体外很难分离，目前检测PCV感染主要采用分子生物学方法，包括聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术和实时荧光定量PCR(quantitative real-timePCR)技术。如，“申请号202010008953.8”一种猪圆环病毒4型与3型PCR鉴别诊断试剂盒及其检测方法、“申请号201711324169.2”用于检测猪圆环病毒2型和圆环病毒3型的双重PCR引物、检测方法及试剂盒等，但此类方法耗时费力，需要专业人员和昂贵的仪器，且不能实现对不同亚型PCV的现场快速鉴别诊断。

核酸恒温扩增技术(Nucleic acid isothermal amplification technology，NAIAT)可以在恒温条件下实现对靶序列的高效扩增，且结果可通过肉眼直接观察。该方法具有简单、特异性强、结果便于观察、不需要精密仪器等优势，目前已用于多种病原检测。

发明内容

本发明的目的在于提供猪圆环病毒2型、3型、4型现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒及其使用方法，以具有致病性的PCV2型、3型、4型为研究对象，开发一种针对不同基因型PCV的现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒，实现PCV2型、3型、4型的快速鉴别诊断。

本申请基于现场即时检测技术(Point-of-care testing，POCT)生产的核酸现场快速提取试剂盒，通过核酸吸附材料吸附，仅1-3分钟便可实现对动物口鼻肛拭子、血液、组织等多种样本的核酸快速提取，且无需任何设备。在检测阶段，可通过直接从核酸吸附材料中扩增核酸，实现对结果的可视化判定。该方法在病原微生物检测方面具有简便、特异性强、结果便于观察、只需要一个恒温设备(或数显保温杯)以及不受检测环境限制等优势，具有巨大的市场前景。基于该方法建立的针对PCV不同基因型的快速鉴别诊断方法，对临床PCVAD的诊断和治疗有重要意义。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

猪圆环病毒2型、3型、4型现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒，包括如表1所示的组分：

表1 PCV2型、3型、4型现场快速高灵敏鉴别诊断试剂盒组分