[发明专利]一种高特异检测肝素结合蛋白的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种高特异检测肝素结合蛋白的试剂盒及其应用，涉及免疫检测技术领域，该试剂盒包括联接有异硫氰酸荧光素的HBP结合抗体、标记有发光标记物的HBP标记抗体以及表面包被了异硫氰酸荧光素抗体的固相载体，通过异硫氰酸荧光素与抗异硫氰酸荧光素系统对样本进行检测，很好地避免内源性生物素的干扰，并且特异性高、稳定性好，在检出限上更有优势。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体而言，涉及一种高特异检测肝素结合蛋白的试剂盒及其应用。

背景技术

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。脓毒血症是指由感染引起的全身性炎症反应综合征(systemicinf1animatoryresponsesyndrome，SIRS)，临床上证实有感染或高度可疑感染，一旦发生后，病情发展迅速，全身凝血功能紊乱和免疫炎症反应失衡，诱发器官功能衰竭，导致死亡，如何在感染性疾病的预防和治疗中及早地采取合理的应对措施是成功的关键,目前看来不管是在临床还是实验室研究,都需要一种可以在病人感染早期就能进行鉴定的方法。

肝素结合蛋白(heparin-binding protein,HBP)是存在于中性粒细中的蛋白质，由Shafer教授在1984年发现并分离成功。由于当时测得相对分子质量为37000，因此将其命名为CAP37(cationic antimicrobial protein of 37000)。后来学者又从嗜苯胺蓝颗粒中分离出具有杀菌活性的嗜苯胺蓝蛋白，命名为Azurocidin，即天青杀素。再后来发现其具有极强的肝素结合能力，因此命名为肝素结合蛋白(Heparin-bindinprotein，HBP)肝素结合蛋白是细菌感染最早升高的标志物，当发生感染时，细菌侵入血管内，刺激中性粒细胞释放HBP，血浆中HBP含量升高。HBP通过其自身较强的正电荷，改变血管内皮细胞通透性，诱发血浆渗漏与组织水肿(炎症反应的特征性表现)。另外HBP激活单核细胞和巨噬细胞，释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(INF-γ)等炎性介质，进而增强机体对感染或损伤的免疫反应，与其他传统感染指标如PCT、CRP、IL-6、白细胞数量等相比，HBP的感染变化出现早，在灵敏度、特异性、阳性和阴性检出率等综合指征显著优于其他感染指标。动态监测血浆HBP浓度，可用于评估脓毒症的严重程度，预测严重感染患者休克风险、脓毒症患者心搏骤停风险等，对临床细菌感染性疾病尽早诊断和治疗具有重要指示意义。最常用的指标有：降钙素原,C-反应蛋白,白细胞计数,中性粒细胞比,血沉,体温等，但上述指标都不同程度的存在滞后，敏感度低及特异性不高的缺陷，在感染性疾病的预防和治疗中，如何及早地采取合理的应对措施是成功的关键。

近期有研究发现肝素结合蛋白(heparin-binding protein，HBP)可以作为新兴的诊断严重脓毒血症及脓毒血症性休克的早期生物标志物，可以对严重感染患者即将发生的休克进行预测。HBP是一种颗粒释放蛋白，以它作为临床新的炎性标志物，具有早期、特异、敏感的特性，优于传统的炎性标志物，具有对病情早期评估，预后评价及疗效观察的价值。

不管是在临床还是实验室研究，都需要一种可以在病人感染早期就能进行鉴定的方法。目前，临床上常用的产品有酶联免疫分析法、胶乳比浊法、磁微粒化学发光法以及免疫荧光层析法等。酶联免疫分析法能准确地检测样品中的肝素结合蛋白浓度，但实际操作中实验耗时较长，操作过程比较复杂。胶乳比浊法和免疫荧光层析法可以快速检测，但准确度偏低，无法为临床判断提供可靠的依据。现有的磁微粒化学发光法利用生物素-链霉亲和素放大系统，虽然在特异性，灵敏度等方面都有所提高，但无法避免内源性生物素的干扰，使得检测结果不能得到保障。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测肝素结合蛋白的试剂盒及其方法和应用。

本发明是这样实现的：