[发明专利]一种乳酸菌的保藏方法

说明书

本发明涉及微生物菌种保藏领域，具体为一种乳酸菌的保藏方法。采用蔬菜作为菌种保藏载体，将乳酸菌接种到蔬菜颗粒和改良MRS培养基的混合液中培养，培养完成后离心，弃去上清液，收集蔬菜颗粒密封保藏，保藏温度‑20℃～4℃。本发明的保藏方法克服了现有技术存在的缺陷，提供一种适用于生产企业，保藏时间长又操作简单实用、菌种质量稳定可靠，保存成本低的微生物菌种保藏方法。

技术领域

本发明涉及微生物菌种保藏领域，具体为一种乳酸菌的保藏方法。

背景技术

目前微生物菌种通常采用定期移植保藏法、液体石蜡保藏法、冷冻干燥、液氮超低温保藏法。低温条件下保藏可减缓微生物菌种的代谢活动，抑制其繁殖速度，达到减少菌株突变，延长菌种保藏时间的目的。

定期移植保藏法：是一种经典的简易保藏法，也称为传代保藏法。该法包括斜面培养、液体培养和穿刺培养等。这种方法优点是操作简单，缺点是斜面培养基与空气接触面大，脱水较快，一般在半年内就会干缩；棉塞容易吸水变潮，容易导致菌种染菌；保藏温度较高，菌种仍有一定的代谢活动，可进行繁殖，为了防止菌种死亡，通常3～4个月就应该传代转管，不但加大了工作量，而且还会由于菌种传代频繁，菌种变异频率较高，活力减弱。

液体石蜡保藏法：基本方法与定期移植保藏法相同，为了防止因培养基的水分蒸发和阻止氧气进入，在斜面培养物上覆盖液体石蜡。该方法优点是菌种保藏时间长，一般2～10年不等，缺点是只适应于不能分解液体石蜡的微生物菌种的保藏；菌种保藏时必须用试管架竖直摆放，保藏占用的空间较大，整个操作比较繁琐。

冷冻干燥法是将拟保藏的菌种悬浮液处于低温冻结状态，在真空条件下使之升华，达到干燥目的，低温、干燥和隔绝空气是菌种保藏的三要素，在该状态下，微生物处于休眠状态，代谢活动基本终止，故保藏时间较长，但设备要求高，投资大。

液氮超低温保藏是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物，此方法也是设备要求高，操作复杂。另外复苏时也比较麻烦。

乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的统称，乳酸菌具有多种生理功能,广泛应用于食品,饲料,医药等行业.延长乳酸菌活菌保藏期是目前乳酸菌制剂研制与开发的技术关键问题。

乳酸菌使用以上四种保藏方法都有不足之处。液体石蜡保藏法只适合斜面和穿刺培养，但斜面培养法因斜面培养基与空气接触面大不适合乳酸菌的培养，穿刺培养在菌种活化时不方便操作。冷冻干燥法和液氮超低温保藏方法操作复杂，技术含量高，设备投入高，运行成本高，只适合专业保藏机构使用，不适合生产企业使用。定期移植保藏法中的液体培养属于乳酸菌比较常见的保藏方法，但是由于液体培养必须用试管架竖直摆放，保存占用的空间较大，最重要的是液体培养每两个月左右需传代一次，否则菌种会死亡，不但加大了工作量，而且还会由于菌种传代频繁，菌种变异频率较高，活力减弱。基于以上原因急需研究一种适合企业使用的简单方便、无需总传代的乳酸菌保藏方法。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种乳酸菌的保藏方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种乳酸菌的保藏方法，采用蔬菜作为菌种保藏载体，将乳酸菌接种到灭菌后的蔬菜颗粒和改良MRS培养基的混合液中培养，培养完成后离心，弃去上清液，收集蔬菜颗粒密封保藏，保藏温度-20℃～4℃。

所述蔬菜颗粒和改良MRS培养基的混合液为：蔬菜颗粒20g-30g、蛋白胨6g-10g、牛肉膏6g-10g、葡萄糖12g-20g、柠檬酸三铵2g、酵母膏5g、乙酸钠2g、K₂HPO₄ 2g、MgSO₄·7H₂O0.58g、MnSO₄·4H₂O 0.25g、蒸馏水1L。