[发明专利]chs3*酿酒酵母孢子的应用及β-葡聚糖微球的制备方法

说明书

本发明公开了一种chs3Δ酿酒酵母孢子的应用，所述应用为chs3Δ酿酒酵母孢子在制备β‑葡聚糖微球中的应用；本发明还公开了β‑葡聚糖微球的制备方法和应用，所述β‑葡聚糖微球的制备方法包括培养chs3Δ酿酒酵母营养细胞产孢；纯化chs3Δ孢子并制备β‑葡聚糖微球。本发明的制备方法操作过程简便、提纯效率高，制备出的β‑葡聚糖微球能够快速引起哺乳动物细胞的免疫刺激，诱导释放大量细胞因子；制备的β‑葡聚糖微球，可用于食品、生物材料和医药领域，具有极好的发展前景。

技术领域

本发明属于生物材料领域，尤其涉及一种chs3Δ酿酒酵母孢子的应用及β- 葡聚糖微球的制备方法和β-葡聚糖微球的应用。

背景技术

β-葡聚糖是由β-1,3、β-1,6和β-1,4键组成的葡萄糖聚合物。在自然界中，这种低聚糖主要存在于微生物和植物的细胞壁中。β-葡聚糖具有多种生物活性，如降低胆固醇、抗氧化、诱导免疫刺激以及抗肿瘤等作用，因此，它们常被用作药物和食品添加剂。

β-葡聚糖可以通过与细胞表面受体结合来诱导免疫刺激。巨噬细胞和树突状细胞会表达C型凝集素受体Dectin-1，该受体具有免疫受体酪氨酸活化基序 (ITAM)结构域，可特异性识别β-1,3-葡聚糖，当与β-1,3-葡聚糖结合后，脾酪氨酸激酶(Syk)被招募到ITAM结构域上，随后激活下游信号通路，从而诱导细胞的吞噬作用以及促炎性细胞因子的分泌，口服β-葡聚糖可实现Dectin-1的免疫刺激。可溶性的β-1,3-葡聚糖溶液和难溶性的β-1,3-葡聚糖颗粒都能与Dectin-1 受体结合，但是，一些研究报道，dectin-1的信号通路只能被难溶性的β-1,3-葡聚糖颗粒激活。

酿酒酵母，也称为面包酵母，是一种公认的安全微生物。因此，从这种微生物中提取的酵母β-葡聚糖可被用作膳食补充剂。酵母细胞壁中的β-葡聚糖由β-1,3连接的主链和β-1,6连接的支链组成。除了β-葡聚糖，酵母细胞壁中还含有甘露聚糖和几丁质。酵母细胞壁由β-葡聚糖层和甘露聚糖层组成，其中，β-葡聚糖层被甘露聚糖层所覆盖。酿酒酵母的二倍体细胞在受到营养饥饿时分化为孢子，这是一种休眠的细胞形式。在孢子形成过程中，减数分裂产生的4个单倍体核分别被孢子质膜和孢子壁包裹。这些过程发生在母细胞内，因此，母细胞变成一个携带4个孢子的子囊。

现有技术方法通常采取从酵母营养细胞中提取葡聚糖，酵母营养细胞壁组成为从内到外为两层，分别是葡聚糖层和甘露糖层，在利用酵母营养细胞提取葡聚糖时，要先把甘露糖层去掉，操作比较繁琐。专利CN201010188411.X公开了高β-葡聚糖含量的酿酒酵母突变菌株(Saccharomycescerevisiae)FFLM2.0016。该突变菌株的保藏号为CGMCC No.3730,是由菌株Saccharomyces cerevisiae 2.0016(Y-8)经过搭载“实践8号”卫星空间诱变后,筛选出的高3-葡聚糖含量的突变菌株。该突变菌株的生物量、细胞壁厚度及β-葡聚糖含量均比诱变前菌株 Saccharomyces cerevisiae 2.0016(Y-8)显著增加。上述技术方案利用物理方法对酵母营养细胞进行突变，得到营养细胞壁较厚的菌株，从而获得高含量葡聚糖。

现有技术方案从酵母营养细胞中提取葡聚糖时，操作过程繁琐，且在去除甘露糖层时，会发生去除不完全的情况，提纯效率低。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种新的chs3Δ酿酒酵母孢子的应用；本发明的另一目的是提供一种操作过程简便、提纯效率高的β-葡聚糖微球的制备方法；本发明另一目的是提供一种β-葡聚糖微球在免疫刺激中作为激活剂的应用。

技术方案：本发明的chs3Δ酿酒酵母孢子在制备β-葡聚糖微球中的应用。

应用上述chs3Δ酿酒酵母孢子制备β-葡聚糖微球的方法，包括培养chs3Δ酿酒酵母营养细胞产孢；纯化chs3Δ孢子并制备β-葡聚糖微球；