[发明专利]经呼吸道递送氧化铁纳米颗粒的生物安全性评价方法在审
| 申请号： | 202111070611.X | 申请日： | 2021-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN113846138A | 公开（公告）日： | 2021-12-28 |
| 发明（设计）人： | 孙夕林;李迎波;郑利敏;王凯;吴丽娜;杨洁;徐佐宇;杨丽丽;方芳 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;A61K49/00 |
| 代理公司： | 郑州慧广知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 41160 | 代理人： | 付晓利 |
| 地址： | 150000 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 呼吸道 递送 氧化铁 纳米 颗粒 生物 安全性 评价 方法 | ||
1.经呼吸道途径递送氧化铁纳米颗粒的生物安全性评价方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)内毒性检测：使用鲎试剂对SPIONs进行凝胶法内毒素检测；
(2)细胞活性测定：分别将不同浓度的SPIONs与巨噬细胞和人肺上皮细胞共孵育24-48小时后，使用MTT法测定细胞存活率；
(3)血液分析：在健康BALB/c小鼠体内经呼吸道递送SPIONs后，不同时间点行静脉采血，对肝肾功能、血常规指标进行血生化分析；
(4)肺泡灌洗液分析：在健康BALB/c小鼠体内经呼吸道递送SPIONs后，不同时间点进行肺泡灌洗，对肺泡灌洗液进行组织炎症因子检测、细胞涂片分析；
(5)炎症细胞因子检测：在健康BALB/c小鼠体内经呼吸道递送SPIONs后，不同时间点取各主要器官，抽取组织mRNA，进行炎症细胞因子mRNA的RT-PCR检测；
(6)纳米颗粒生物分布：在健康BALB/c小鼠体内经呼吸道递送SPIONs后，不同时间点取各主要器官，处理后使用ICP-MS检测各组织内铁离子含量；
(7)纳米颗粒肺内分布：在健康BALB/c小鼠体内经呼吸道递送SPIONs后，不同时间点取肺组织，切片后进行铁染色，观察纳米颗粒在肺泡及支气管部位的分布情况；
(8)组织病理损伤分析：在健康BALB/c小鼠体内经呼吸道递送SPIONs后，不同时间点取各主要器官进行病理学切片并用光学显微镜观察；
(9)肺纤维化分析：在健康BALB/c小鼠体内经呼吸道递送SPIONs后，不同时间点取肺组织，切片后进行马松特异性染色，观察肺部纤维化情况。
2.根据权利要求1所述的经呼吸道途径递送氧化铁纳米颗粒的生物安全性评价方法，其特征在于：步骤(2)中，与巨噬细胞和人肺上皮细胞共孵育的SPIONs的浓度为0～1000μg/mL。
3.根据权利要求1所述的经呼吸道途径递送氧化铁纳米颗粒的生物安全性评价方法，其特征在于：步骤(3)-(9)中，经呼吸道途径递送的SPIONs的浓度为1mg Fe/mL，体积为0～100μL。
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