[发明专利]一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液

说明书

本发明属于牙髓组织冻存技术领域，尤其是一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液，解决了现有技术中细胞冻存液会对牙髓干细胞造成一定的损伤，无法保证干细胞的活力，冻存后细胞复苏率低，细胞增殖率较低，影响干细胞的临床利用等问题，所述牙髓或牙髓干细胞的冻存液，包括以下原料：胎牛血清、羟乙基淀粉、色甘酸钠、甘油、十二烷基硫酸钠、右旋葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠二水合物和培养基。本发明提出的冻存液对牙髓或牙髓干细胞有良好的的稳定和保护效果，能够有效保护牙髓干细胞的细胞活力，且冻存后的细胞复苏率高，增值能力强，本发明冻存液冻存方法简单，易于操作，值得推广。

技术领域

本发明涉及牙髓组织冻存技术领域，尤其涉及一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液。

背景技术

牙髓间充质干细胞(DPSCs)是一种具有高度增殖能力和多向分化潜能的间充质干细胞，具有来源丰富、取材安全方便、不涉及伦理学问题、免疫原性低等优点，在再生医学领域取得了很大进展。牙髓间充质干细胞能够用于牙本质、牙髓、牙体、牙冠的组织修复与再生，还可以用于颅骨、颌骨及面骨的损伤修复。并且，牙髓干细胞还在治疗脑血管意外损伤、脊髓损伤、帕金森氏病、心肌梗死、糖尿病和免疫缺陷等疾病上也贡献极大。牙髓干细胞的增殖能力强、组织相容性高、储存方便，给现代医学带来极大的便利。

细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。在牙髓间充质干细胞的临床应用中涉及到牙髓干细胞的冻存，细胞冻存是将37℃培养的细胞，添加营养成分及防冻保护剂DMSO，通过逐渐降温的方式将细胞长期超低温冻存于液氮中的过程。冻存过程会显著改变细胞的热力学、化学和物理环境，有伴随造成生物性损伤的危险，需要在降温前加入冻存液作为保护剂。现有技术中，细胞的冻存多采用二甲基亚砜(DMSO)或普通商品化的培养基、血清等进行细胞冻存。现有的这些冻存液在细胞的冻存过程中会无法避免地对牙髓干细胞造成一定的损伤，无法保证干细胞的活力，冻存后细胞复苏率低，细胞增殖率较低，影响干细胞的临床利用。基于上述陈述，本发明提出了一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中细胞冻存液会对牙髓干细胞造成一定的损伤，无法保证干细胞的活力，冻存后细胞复苏率低，细胞增殖率较低，影响干细胞的临床利用等问题，而提出的一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液。

一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液，包括以下百分比的原料：胎牛血清12-18%、羟乙基淀粉3-5%、色甘酸钠2-7%、甘油8-15%、十二烷基硫酸钠1-2%、右旋葡萄糖5-15%、乙二胺四乙酸二钠二水合物2-5%、余量为培养基。

优选的，所述牙髓或牙髓干细胞的冻存液，包括以下重量百分比的原料：胎牛血清14-16%、羟乙基淀粉3.5-4.5%、色甘酸钠3-6%、甘油10-14%、十二烷基硫酸钠1.2-1.8%、右旋葡萄糖8-12%、乙二胺四乙酸二钠二水合物3-4%、余量为培养基。

优选的，所述牙髓或牙髓干细胞的冻存液，包括以下百分比的原料：胎牛血清15%、羟乙基淀粉4%、色甘酸钠4.5%、甘油12%、十二烷基硫酸钠1.5%、右旋葡萄糖10%、乙二胺四乙酸二钠二水合物3.5%、余量为培养基。

优选的，所述培养基为DMEM、RPMI1640或DMEM/F12中的一种。

优选的，所述冻存液冻存牙髓或牙髓干细胞的方法如下：

S1、准备冻存液制备用原料，包括胎牛血清、羟乙基淀粉、色甘酸钠、甘油、十二烷基硫酸钠、右旋葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠二水合物和培养基；

S2、先将胎牛血清、羟乙基淀粉、甘油和右旋葡萄糖依次加入到培养基中，加入牙髓或牙髓干细胞，在0-5℃的温度下，预冷20-30min，然后加入色甘酸钠、十二烷基硫酸钠和乙二胺四乙酸二钠二水合物，先第一次降温至-48℃，预冻20-40min，继续第二次降温至-80℃，冷冻3-5h后，转移至液氮中保存即可。