[发明专利]一种快速检测阴道病原微生物的多重PCR试剂盒制作方法

权利要求书

1.一种快速检测阴道病原微生物的多重PCR试剂盒制作方法，其特征在于，包含以下步骤：

①分别制备念珠菌、加德纳菌和毛滴虫的特异引物序列；

②制备适合念珠菌、加德纳菌和毛滴虫这三种病原的核酸提取试剂盒，适用于阴道分泌物标本；

③找到适合念珠菌、加德纳菌和毛滴虫这三种病原的荧光PCR反应条件，制作荧光定量PCR检测试剂；

④组装成完整试剂盒。

2.根据权利要求1所述的快速检测阴道病原微生物的多重PCR试剂盒制作方法，其特征在于：

所述的步骤①中，念珠菌、加德纳菌和毛滴虫的特异引物序列包括：

SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物对；SEQ ID NO:4～5所示核苷酸序列的引物对；SEQ ID NO:7～8所示核苷酸序列的引物对。

3.根据权利要求1所述的快速检测阴道病原微生物的多重PCR试剂盒制作方法，其特征在于：

所述的步骤②中，适合念珠菌、加德纳菌和毛滴虫这三种病原的核酸提取试剂盒包括：

SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针；SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针；SEQ IDNO:9所示核苷酸序列的探针。

4.根据权利要求3所述的快速检测阴道病原微生物的多重PCR试剂盒制作方法，其特征在于：

SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团CY5，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ3；

SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；

SEQ ID NO:9所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团ROX，3’端标记有荧光淬灭基团MGB。

5.根据权利要求1所述的快速检测阴道病原微生物的多重PCR试剂盒制作方法，其特征在于：

所述的步骤③中，荧光定量PCR检测试剂包括qPCR Master Mix酶混合液、qPCR MasterMix反应缓冲液。