[发明专利]一种同时生产倍半萜和初级代谢产物的重组微生物及其应用

权利要求书

1.一种同时生产倍半萜和初级代谢产物的菌株，其特征在于，所述菌株含有甲羟戊酸途径的相关基因、部分或全部经过密码子优化的倍半萜的合成基因和初级代谢产物合成的相关基因；所述初级代谢产物包括泛酸、角鲨烯、脂肪酸和维生素B2中的至少一种；所述倍半萜包括β-法尼烯；

所述的甲羟戊酸途径的相关基因包括ERG10、ERG13、tHMG1、ERG12、ERG8、MVD1、IDI1和ERG20基因；所述甲羟戊酸途径中基因的拷贝数为ERG10：ERG13：tHMG1：ERG12：ERG8：MVD1：IDI1：ERG20＝2：2：X：2：2：2：2：2，X为≥1的整数；

所述β-法尼烯合成基因包括bFS，所述的bFS基因含有F11S、M35T、T319S、I434T、I460V突变，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的同时生产倍半萜和初级代谢产物的菌株，其特征在于，所述泛酸合成的相关基因包括ilv2、ilv6、ilv5、ilv3、Ecm31p、pan5、pan6和PAND基因；所述的PAND基因经过密码子优化，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1或2所述的同时生产倍半萜和初级代谢产物的菌株，其特征在于，所述同时生产倍半萜和所述泛酸的菌株包括：

将质粒pPT1、pPT2和pXZ162共转化至酿酒酵母JVA139获得的菌株JFS1；

或者将所述菌株JFS1经过GAL80基因的敲除，获得的菌株JFS2；

或者将质粒pPT1、pPT3和pXZ162共转化至酿酒酵母JVA139获得的菌株JFS3；

或者将所述菌株JFS3经过GAL80基因的敲除，获得的菌株JFS4；

其中，

所述质粒pPT1为以pMD19T为骨架载体，启动子为pGAL1、pGAL2、pGAL7和pGAL10，包含ilv2、ilv6、ilv5和ilv3基因，所述质粒pPT1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述质粒pPT2为以pMD19T为骨架载体，启动子为pGAL1、pGAL2、pGAL7和pGAL10，包含Ecm31p、pan5、pan6和PAND基因，所述质粒pPT2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述质粒pPT3为以pMD19T为骨架载体、启动子为pGAL1、pGAL7、pGAL10、包含Ecm31p、pan5和pan6基因，所述质粒pPT3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述质粒pXZ162的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.根据权利要求1所述的同时生产倍半萜和初级代谢产物的菌株，其特征在于，所述角鲨烯合成的相关基因包括POS5、ADH2、ACS2、ALD6和ERG9基因。

5.根据权利要求1或4所述的同时生产倍半萜和初级代谢产物的菌株，其特征在于，所述同时生产倍半萜和所述角鲨烯的菌株包括：

将质粒pXZ171、pXZ159线性化后和pXZ161共转化至酿酒酵母JVA139获得的菌株JSX1；后将质粒pSX01线性化后和pXZ162共转化至所述菌株JSX1获得的菌株JSX2；

或者将所述菌株JSX2经过GAL80基因的敲除，获得的菌株JSX3；

其中，

所述质粒pXZ171以pMD19T为骨架载体，启动子为pGAL1、pGAL7和pGAL10，包含ADH2、ACS2和ALD6基因，所述质粒pXZ171的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

所述质粒pXZ159以pMD19T为骨架载体，启动子为pGAL1，包含POS5基因，所述质粒pXZ159的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

所述质粒pSX01以pMD19T为骨架载体，启动子为pHXT1，包含ERG9基因，所述质粒pSX01的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

所述质粒pXZ161的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。