[发明专利]一种副猪嗜血杆菌佐剂疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种副猪嗜血杆菌佐剂疫苗及其制备方法。属于植物材料的药物制品技术领域。本发明将银杏叶黄酮苷与副猪嗜血杆菌疫苗原液相结合，制备出副猪嗜血杆菌佐剂疫苗。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：该疫苗能够有效提高副猪嗜血杆菌的IgG抗体效价，有效提高细胞因子IL‑2，IL‑4、TNF‑α、IFN‑γ水平，仔猪免疫副猪嗜血杆菌佐剂疫苗二免后2周，仔猪T细胞亚群CD4⁺、CD8⁺数量显著增高，实现了对副猪嗜血杆菌血清4型、血清5型和血清13型攻击的60～100％的保护效果，为致病性副猪嗜血杆菌提供了新型疫苗和免疫方法。

技术领域

本发明涉及植物材料的药物制品技术领域，更具体的说是涉及一种副猪嗜血杆菌佐剂疫苗及其制备方法。

背景技术

副猪嗜血杆菌是一种革兰阴性短小杆菌，常定植于猪的上呼吸道。该菌主要危害仔猪和成年猪，主要特征是纤维蛋白性多浆膜炎、关节炎和脑膜炎，亦可导致猪的猝死。近年已经鉴定出的副猪嗜血杆菌血清型共有15种，其中血清型4型和5型最为普遍。

目前对副猪嗜血杆菌感染的发病机制的了解较为有限，预防措施仍不能完全控制该病的发生。通常情况下，控制副猪嗜血杆菌病发生的关键因素是仔猪自身的天然免疫及其从母源抗体获得的免疫力，该病的控制主要通过疫苗接种的方法。

然而，猪副嗜血杆菌疫苗存在如下问题：(1)由于其血清型较多，且还有很大比例的菌株没有分型，因此高效交叉保护疫苗的研制存在极大困难；(2)佐剂的局限性，使得佐剂种类及佐剂用量影响后续疫苗效果。

综上，如何提供一种高效交叉保护的副猪嗜血杆菌佐剂疫苗是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种副猪嗜血杆菌佐剂疫苗及其制备方法。从银杏科植物Ginkgobilobal中分离、提取并制备了佐剂有效组份银杏叶黄酮苷，再与副猪嗜血杆菌疫苗原液相结合，制备出副猪嗜血杆菌佐剂疫苗。具有很好地免疫调节功能，能调节淋巴细胞、吞噬细胞活性，调节机体血清中细胞因子水平等，具有天然、低毒、无药物残留等优点。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种副猪嗜血杆菌佐剂疫苗，包括疫苗原液和佐剂；

所述疫苗原液由(4+5+13)型菌液抗原组成，三者体积比为1：1：1；

所述佐剂为银杏叶黄酮苷，其在佐剂疫苗中的终浓度为1～4mg/mL。

进一步的，银杏叶黄酮苷在佐剂疫苗中的终浓度为4mg/mL。

进一步的，所述佐剂疫苗中4、5型菌液抗原的菌浓度为2.0×10⁹CFU/mL，13型菌液抗原的菌浓度为2.5×10⁹CFU/mL。

一种副猪嗜血杆菌佐剂疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备银杏叶黄酮苷；

(2)制备菌液抗原：采用液体发酵培养副猪嗜血杆菌4、5和13型菌液，之后加入菌液体积0.25％的甲醛溶液灭活后保存备用；

(3)制备疫苗原液：按照比例配置疫苗原液；

(4)制备佐剂疫苗：将疫苗原液与佐剂配置成佐剂疫苗。

进一步的，步骤(2)中所用培养基包括质量浓度3％的胰蛋白大豆肉汤培养基、新生牛血清和质量浓度为0.04％的NAD溶液，三者的体积比为5000:250:1。

进一步的，所述步骤(2)中的培养条件为：37℃、180r/min培养22～24h。