[发明专利]一种基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法

权利要求书

1.一种基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，主要包括细胞培养和荧光染料摄取检测两部分：

(1)悬浮培养

取悬浮培养细胞系的THP-1细胞，使用添加β巯基乙醇的标准RPMI1640培养液，日常维持培养通过定期添加或替换培养液来保障细胞的生存环境稳态，换液周期2-3天；监测细胞悬液浓度不超过1×10⁶个/ml；

细胞悬液调整浓度为4×10⁵个/ml，添加十四烷酰佛波醇乙酸酯，将细胞悬液接种于96孔板，24小时后换液去除未贴壁细胞，即完成巨噬细胞形态分化；

使用空白RPMI1640培养液维持培养一段时间以去除十四烷酰佛波醇乙酸酯的作用效应，细胞做好染毒处理准备；

(2)荧光染料摄取检测半通道活性

细胞染毒处理后，采用溴化乙锭为荧光染料，使用标准RPMI1640培养液配置浓度为25μM的溴化乙锭荧光染色储备液，将溴化乙锭染色储备液加入96孔板中，添加荧光染液后将96孔板置于冰上，避光孵育，将96孔板置入荧光酶标仪检测荧光强度结果。

2.根据权利要求1所述基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，其中，标准RPMI1640培养液中添加的β巯基乙醇为5μM。

3.根据权利要求1所述基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，其中，添加十四烷酰佛波醇乙酸酯至终浓度为15ng/ml。

4.根据权利要求1所述基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，其中，使用空白RPMI1640培养液维持培养24小时以去除十四烷酰佛波醇乙酸酯的作用效应。

5.根据权利要求1所述基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，其中，96孔板规格为100μl/孔，采用全黑培养板或黑色底透培养板类型，且细胞接种孔周围需要至少间隔1-2个空白孔。

6.根据权利要求1所述基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，其中，溴化乙锭染色储备液按10μl/孔加入96孔板中，并在孔中稀释成2.5μM的染色工作液。

7.根据权利要求1所述基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，其中，将添加溴化乙锭染色储备液的96孔板置于4℃避光孵育5-10分钟。

8.根据权利要求1所述基于荧光染料摄取的批量半通道功能水平检测方法，其中，荧光酶标仪的激发波长508nm，发射波长605nm。