[发明专利]一种抗Cry3Bb蛋白单域重链抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗Cry3Bb蛋白单域重链抗体及其应用，属于基因工程抗体和食品生物技术领域。该单域重链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该氨基酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所述，本发明提供的单域重链抗体可以有效结合Cry3Bb蛋白，可应用于Cry3Bb的免疫学检测，该单域重链抗体具有结合活性高、制备简单、稳定性好等特点。

技术领域

本发明属于基因工程抗体和食品生物技术领域，具体涉及一种抗Cry3Bb蛋白单域重链抗体及其应用。

背景技术

Cry蛋白(crystal protein)是一类杀虫蛋白，对鳞翅目、双翅目、鞘翅目等多种昆虫具有高效毒杀作用，被广泛用作生物杀虫剂和转基因杀虫成分，常见的Cry蛋白包括Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1C、Cry2A和Cry3Bb等。不同种类的Cry蛋白杀虫谱不同，Cry3Bb主要对鞘翅目昆虫如马铃薯甲虫有毒力。近年来，转基因农作物的种植面积呈快速增长趋势，但转基因农作物的安全性并未得到广泛认同，转基因农作物可能对生态环境和人体健康造成潜在危害。为安全起见，许多国家已经对转基因产品实行了标签制度。因此，对转基因农作物及其产品中的Cry蛋白进行有效监控和快速检测是十分必要的。

Cry蛋白的检测方法主要是基于核酸和蛋白质水平的分析，包括PCR方法和ELISA方法。PCR方法具有灵敏度高、准确性高等特点，但不能对表达的Cry蛋白进行定量检测，且需要专业的仪器设备和操作人员。而ELISA方法具有简便、快速、低耗等特点，适合于农作物和环境中Cry蛋白的现场快速定性和定量检测。其中，高特异性、高亲和性抗体的制备是ELISA方法建立的前提和关键。

单域重链抗体(VHH)，源于驼科动物(骆驼、羊驼等)体内缺失轻链的重链抗体，是目前已知最小的功能性抗体片段，只含有3个互补决定区(Complementarity-determiningregion,CDR)，却具有与普通抗体相同的抗体功能。与普通抗体相比，单域重链抗体的CDR3更长，可以形成凸环结构，能够伸入目标蛋白的凹槽、裂缝等普通抗体难以达到的表位。同时，单域重链抗体还具有高亲和力、高水溶性、易表达等特点。因此，单域重链抗体是一种优良的抗体材料；然而到目前为止，暂未见抗Cry3Bb蛋白单域重链抗体的报道。

发明内容

本发明的目的是通过噬菌体展示单域重链抗体库筛选，获得针对Cry3Bb蛋白的单域重链抗体。

本发明提供了一种抗Cry3Bb蛋白单域重链抗体,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明所提及的单域重链抗体包括四个框架区FR和三个互补决定区CDR。其中，框架区(FR1-FR4)的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6和SEQ IDNO.8所示；互补决定区(CDR1-CDR3)的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5和SEQID NO.7所示。

本发明同时提供了编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示抗Cry3Bb单域重链抗体的核苷酸，其序列如SEQ ID NO.9所示。

本发明还提供了一种重组表达载体，其含有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种重组工程菌，其含有所述重组表达载体。

本发明还提供了氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的单域重链抗体在Cry3Bb蛋白检测中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明制备的单域重链抗体可替代传统抗体，应用于Cry3Bb蛋白的免疫学检测分析，该单域重链抗体具有结合活性性高、稳定性高、易规模化制备等特点。

附图说明

图1单域重链抗体的氨基酸序列示意图；