[发明专利]海鲷鱼胶原蛋白肽的制备方法

权利要求书

1.海鲷鱼胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：依次以NaOH溶液和水清洗海鲷鱼骨后，将鱼骨碎化制成鱼骨块；

步骤2：将鱼骨块以乙二胺四乙酸二钠盐溶液脱钙、再以正丁醇溶液脱脂后，以乙酸溶液进行提取，制得提取液；

步骤3：提取液经正丁醇溶液萃取、活性炭脱色后，经盐析取沉淀以乙酸溶液溶解，获得蛋白溶液；

步骤4：所述蛋白溶液经透析后，经酶解制得鲷鱼胶原蛋白肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中：

NaOH溶液的浓度为0.1mol/L，海鲷鱼骨与氢氧化钠溶液的料液比为1∶20；所述NaOH溶液进行清洗的条件为搅拌48h，期间每12h更换新鲜NaOH溶液；所述水清洗至中性。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中：所述乙二胺四乙酸二钠盐溶液中，乙二胺四乙酸二钠盐的浓度为0.5mol/L，pH值为pH7.5；所述鱼骨块与乙二胺四乙酸二钠盐溶液的料液比为1∶20；所述脱钙的条件为搅拌3天，期间每24h更换新鲜乙二胺四乙酸二钠盐溶液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中：所述正丁醇溶液中正丁醇的体积分数为10％，所述鱼骨块与正丁醇溶液的料液比为1∶20；所述脱脂的条件为搅拌2天，期间每24h更换新鲜正丁醇溶液。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中：所述乙酸溶液中乙酸的浓度为0.5mol/L，pH值为2.6，所述鱼骨块与乙酸溶液的料液比为1∶40；所述提取的次数为2次，第一次提取的条件为为搅拌3天，第二次提取的条件为搅拌1天，提取后过滤取滤液，合并两次提取的滤液为提取液。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中：正丁醇溶液中正丁醇的体积分数为15％，所述正丁醇溶液与提取液的体积比为1∶20；所述萃取后，取水相并加入活性炭至活性炭质量分数为1％，50℃脱色0.6h；

所述脱色后，经离心取上清液，经0.9mol/L NaCl盐析，搅拌过夜后，离心分离沉淀；

所述沉淀以0.5mol/L乙酸溶液溶解，每g沉淀以40mL乙酸溶液溶解。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中：所述透析的透析袋的分子量为100～300000Da，透析液为去离子水，透析条件为4℃透析2d。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中所述酶解的包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶，每种酶的添加量为碱性蛋白酶400U/mg、中性蛋白酶400U/mg、胰蛋白酶4000U/mg、木瓜蛋白酶400U/mg。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中所述酶解的条件包括：依次进行中性蛋白酶、碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶、胰蛋白酶的酶解；其中，

碱性蛋白酶酶解的pH值为8.0,45℃酶解为9h；

木瓜蛋白酶酶解的pH值为8.0,45℃酶解为8h；

中性蛋白酶酶解的pH值为8.0,45℃酶解为6h；

胰蛋白酶酶解的pH值为6.5,45℃酶解为4h。

10.权利要求1～9任一项所述的制备方法制得的海鲷鱼胶原蛋白肽。