[发明专利]一种用于木质纤维素糖化的复合纤维素酶及其制备方法

权利要求书

1.一种用于木质纤维素糖化的复合纤维素酶的制备方法，其特征在于，所述的复合纤维素酶分别由非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum)MEA-12与里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut-C30(CICC 13052)生产获得单菌的纤维素酶液，再进行混合所得；其中，非洲哈茨木霉MEA-12的保藏编号为CGMCC No.21438。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述复合纤维素酶的β-葡萄糖苷酶活与滤纸酶活的比值为0.6-1.0之间，优选为0.7-0.9，最优选为0.8；更优选地，分别测定两种单菌的纤维素酶的β-葡萄糖苷酶活和滤纸酶活，再根据比例进行混合。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非洲哈茨木霉MEA-12单菌纤维素酶的制备方法为：非洲哈茨木霉MEA-12在产酶培养基的发酵液，离心取上清即得；优选地，其方法为：

1)取非洲哈茨木霉MEA-12孢子，制成孢子悬浮液；

2)接种至种子培养基中，30℃培养1～3d，得种子发酵液；

3)取种子发酵液，按5％～10％的接种量接种至产酶培养基中，30℃培养3～5d，12000rpm离心10min，取上清，得粗纤维素酶溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述里氏木霉Rut-C30生产纤维素酶的制备方法为：里氏木霉Rut-C30在产酶培养基的发酵液，离心取上清即得；优选地，其制备方法如下：

1)取里氏木霉Rut-C30孢子制成孢子悬浮液；

2)接种至种子培养基中，28℃培养2～4d，得种子发酵液；

3)取种子发酵液，按5％～10％的接种量接种至产酶培养基中，28℃培养5～7d，12000rpm离心10min，取上清，得粗纤维素酶溶液。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述种子培养基的配方为：20.0g/L酵母提取物，15.0g/L葡萄糖，6.0g/L KH₂PO₄，2.5g/L(NH₄)₂SO₄，1.0g/L CaCl₂，0.8g/LMgSO₄·7H₂O，2.0g/L吐温80，1.0mL/L微量元素营养液，pH 4.8；所述产酶培养基的配方为：10.0g/L乳糖，10.0g/L微晶纤维素，12.0g/L玉米浆干粉，1.5g/L(NH₄)₂SO₄，1.4g/L CaCl₂，1.2g/L MgSO₄·7H₂O，2.0g/L吐温80，1.0mL/L微量元素营养液，pH 4.8。进一步地，微量元素营养液的配方为：5.0g/L FeSO₄·7H₂O，2.0g/L CoCl₂·6H₂O，1.6g/L MnSO₄·4H₂O，1.4g/LZnSO₄·7H₂O。

6.一种用于木质纤维素糖化的复合纤维素酶，其特征在于，是由权利要求1～5任一项所述的方法制备获得。

7.根据权利要求6所述的复合纤维素酶在木质纤维素糖化中的应用。

8.一种木质纤维素糖化的方法，其特征在于，利用根据权利要求6所述的复合纤维素酶处理木质纤维素。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述木质纤维素为固体碱活性氧蒸煮预处理后的竹粉。

10.根据权利要求7～9所述的方法，其特征在于，所述木质纤维素糖化的体系为：1.5％～2.5％(m:v)的固体碱活性氧蒸煮预处理后的竹粉，20～25FPU/g竹粉的复合纤维素酶载量，以及0.1～0.3％(v:v)的Proclin 300；优选的，酶解糖化的温度为45～55℃，时间为48～72h。