[发明专利]一种1-丙烯磷酸二乙酯杂质的检测方法

说明书

本发明公开了一种1‑丙烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，涉及化学药物分析领域，其采用三重四级杆质谱检测器进行检测。本发明使用高效液相质谱法的多反应监测模式(MRM)检测1‑丙烯磷酸二乙酯，灵敏度高，专属性强，可有效控制磷霉素钠中的1‑丙烯磷酸二乙酯至毒理学阈值(TTC)，即1.5μg/day。

技术领域

本发明涉及化学药物分析领域，特别涉及一种1-丙烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，本发明克服了目前磷霉素钠的基因毒性杂质研究空白的缺点，开发了杂质检测方法，用于产品质量的控制。

背景技术

磷霉素钠对革兰阳性菌、阴性菌均有杀菌作用，对多种耐药的葡萄球菌有较强的抗菌作用，是临床常用的药物。

磷霉素钠的合成路线中，在中间体氢化反应过程中，可能会产生1-丙烯磷酸二乙酯。通过美国Simulations Plus公司的ADME/T性质预测软件ADMET PredictorTM(version9.5.0.16)对1-丙烯磷酸二乙酯的毒性参数做全面预测，该杂质可能产生基因毒性，属于基因毒性杂质。

基因毒性杂质(也叫遗传毒杂质)，通常是指能够引起DNA突变、染色体断裂或者DNA重组的物质。由于基因毒性杂质在很低的浓度下即可诱导基因突变并导致染色体的断裂和重排，因此具有潜在的致癌性，近年来对其关注也越来越重，欧盟、美国等药品监管机构也相继发布了关于基因毒和致癌性杂质的指导原则。

当前面对的问题是，没有相应的检测方法对磷霉素钠中基因毒杂质1-丙烯磷酸二乙酯进行研究和控制。

且基因毒杂质一般要求控制限度较低，相较于其它杂质的研究，难度较大。

发明内容

鉴于目前磷霉素钠的基因毒性杂质研究国内外均未有报道，对此药物的安全性研究不足，本发明提供一种可有效控制磷霉素钠中1-丙烯磷酸二乙酯的检测方法，保证药品质量。本发明解决了磷霉素钠基因毒性杂质研究过程中的瓶颈问题，解决了基因毒性杂质的检测灵敏度问题。该方法操作简捷，灵敏度高，专属性强，分离度好，为控制产品质量提供了一种可行有效的分析方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种1-丙烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，采用三重四级杆质谱检测器，在ESI正离子模式下，MRM多反应监测模式进行检测。

本发明还具有以下附加技术特征：

优选的，包括以下步骤：

(1)精密称取1-丙烯磷酸二乙酯标准品，配制得到1-丙烯磷酸二乙酯对照品储备液和梯度浓度的对照品溶液；

(2)按外标法以MRM图谱中定量离子对的峰面积计算。

优选的，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶做为填充剂。

优选的，流动相A为体积分数为0.2％甲酸水溶液，流动相B为100％乙腈，稀释液为体积比为甲醇∶水＝50∶50，流速0.8ml/min，柱温25℃，运行时间10min，梯度洗脱程序如下：

优选的，电喷雾离子化(ESI)正离子模式下，多反应监测模式(MRM)，干燥气温度300℃，干燥气流量5L/min，雾化气压力20psi，鞘气温度400℃，鞘气流量9L/min，检测时间为1.6-4.9min，其余时间不流入质谱仪。

优选的，1-丙烯磷酸二乙酯多反应监测模式参数如下：