[发明专利]一种高产不饱和脂肪酸的裂殖壶菌的培养基及制备方法

说明书

本发明实施例公开了一种高产不饱和脂肪酸的裂殖壶菌的培养基及制备方法，按照质量比每1000g过滤海水中加入葡萄糖3～5％、细菌蛋白胨0.1～0.2％、酵母提取物0.08～0.12％、磷酸二氢钾0.02～0.03％、甘油1.5～2.5％。本发明中的培养基配方通过提高培养基中的葡萄糖含量及添加甘油的方式来增加培养基中的碳源，确保菌种在发酵过程中养分充足。相比原有培养基，本发明中培养基的葡萄糖含量由20g/L提升至40g/L，甘油由0g/L提升至20g/L。

技术领域

本发明实施例涉及生物技术领域，尤其是一种高产不饱和脂肪酸的裂殖壶菌的培养基及制备方法。

背景技术

现有技术中，菌种发酵的最优培养基配方探索是发酵工艺优化中必不可少的一部分。符合菌种生长周期规律和营养需求的培养基能够更为高效、经济的大规模获得目的菌种。目前实验室及发酵中所使用的培养基配方大多基于先期的实验室经验，没有针对后期诱变后的裂殖壶菌工程菌株的生长周期和营养需求进行更加细致的培养基配方优化。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明创造的实施例提供一种高产不饱和脂肪酸的裂殖壶菌的培养基，按照质量比每1000ml过滤海水中加入葡萄糖3～5％、细菌蛋白胨0.1～0.2％、酵母提取物0.08～0.12％、磷酸二氢钾0.02～0.03％、甘油1.5～2.5％。

优选地，按照质量比每1000ml过滤海水中加入葡萄糖4％、细菌蛋白胨0.15％、酵母提取物0.1％、磷酸二氢钾0.025％、甘油2％。

具体地，海水盐度30～33，pH为8.0。

一种高产不饱和脂肪酸的裂殖壶菌的培养基的制备方法，包括：

将海水经抽滤去除杂质后通过0.22um滤膜过滤并按照质量比每1000g过滤海水中加入葡萄糖3～5％、细菌蛋白胨0.1～0.2％、酵母提取物0.08～0.12％、磷酸二氢钾0.02～0.03％、甘油1.5～2.5％。

进一步地，还包括：

将配置好的液体培养基在高压灭菌锅中灭菌20～40min，温度设置为110～130摄氏度的条件下高压灭菌。

进一步地，还包括：

在超净操作台中无菌环境滴定调节pH至7.1。

进一步地，还包括：

将平板转接入装有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，置于摇床培养箱中培养，作为接种液。

进一步地，还包括：

培养条件为温度20～25℃，转速150～200rpm。

进一步地，还包括：

在摇床中培养60h后，以5％(v/v)的接种比例转接至100ml新鲜的培养基中，并在温度20～25℃，转速150～200rpm的条件下培养。

进一步地，还包括：

培养条件为温度23℃，转速180rpm。

本发明实施例中的培养基配方通过提高培养基中的葡萄糖含量及添加甘油的方式来增加培养基中的碳源，确保菌种在发酵过程中养分充足。相比原有培养基，本发明中培养基的葡萄糖含量由20g/L提升至40g/L，甘油由0g/L提升至20g/L。本发明基于破囊壶菌生长性质，探索并改进了原有培养基配方，调整了原培养基中碳源的种类和比例，并通过梯度法选择到了最适合的碳源比例。在相同培养条件和时间下，本发明中的配方配制的培养基所培养的菌液所含生物量较原有配方最高提升了34.28％，菌液生物量绝对值提升了1.81g/L(52h，Group4/Group1)，大幅提升了发酵得到破囊壶菌的效率。

附图说明