[发明专利]一种用于SAA检测的磁微粒化学发光免疫试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供了一种用于SAA检测的磁微粒化学发光免疫试剂盒的制备方法，包括步骤：S1，配制基础溶液；S2对清洗后的所述磁微粒进行活化，并将活化后的所述磁微粒与所述SAA抗体1进行偶联，得磁微粒与SAA抗体1的结合物；对所述磁微粒与SAA抗体1的结合物用所述磁微粒封闭液进行封闭处理，得所述磁微粒偶联SAA抗体1；S3将吖啶酯和所述SAA抗体2按预设时长进行混合；对所述吖啶酯和SAA抗体2的结合物用所述赖氨酸封闭液进行封闭处理后进行脱盐处理，得所述吖啶酯标记SAA抗体2。本发明能够提高检测的准确度和灵敏度低、避免发生钩状效应、降低检测结果受到的干扰、且操作简便。

技术领域

本发明涉及检测试剂盒，尤其涉及一种用于血清淀粉样蛋白A检测的磁微粒化学发光免疫试剂盒及其制备方法。

背景技术

血清淀粉样蛋白A（human serum amyloid A，SAA）是 1976 年从血清中被分离鉴定出的一类高度保守的急性期蛋白家族成员，也是一种存在于血浆中的脂结合蛋白，相对分子质量约 12000。血清 SAA 是一种敏感的急性期反应蛋白。正常时人体内的SAA主要来源于肝细胞，血清中含量较少，参考范围≤10 mg/L。性别和个体内生理变化没有显著地影响，会随年龄增长有升高。当机体受到细菌、支原体等抗原刺激后，在 IL-1、IL-6 和 TNF等细胞因子的刺激下，肝脏中巨噬细胞、纤维母细胞合成大量 SAA 并释放入血液中，使血液中 SAA 的浓度在 4~6 h 内迅速增加 100 至 1000 倍，半衰期为50min，当机体抗原清除后则迅速降低至正常水平。由于感染性疾病的早期血清 SAA的水平与炎症程度密切相关，故血清中 SAA 可作为感染性疾病的早期诊断的敏感指标，有助于感染性疾病的诊断，疾病活动性和预后的监测。目前为止，共发现 4 种蛋白亚型，其中 SAA1 和 SAA2 蛋白结构 93% 一致，在炎症的急性期显著上调；SAA3 为假基因，不能转录和表达蛋白；SAA4 蛋白不参与急性炎症反应。研究表明，SAA 还与高密度脂蛋白有关，它能在炎症期间调节高密度脂蛋白的代谢；其降解产物能以淀粉样蛋白 A 原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中产生严重的并发症。

同时，有大量报道认为血清 SAA 水平可以作为评估和预测冠心病病情严重程度的敏感标志物。近年来的研究结果表明：SAA在细菌、病毒感染，慢性炎性（类风湿性关节炎、糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化、慢性阻塞性肺疾病），肿瘤等疾病中均有升高，与传统的感染标志物外周血白细胞计数（peripheral bloodwhite blood cell count，WBC）和 C 反应蛋白（C-re-active protein，CRP）相 比，SAA 的优势在于病毒感染期灵敏度高，升高时间较其他标志物早，而且升高幅度大，尤其对“正常”与微小急性相反应可提供更好的鉴别。通常约2/3感冒患者SAA升高，但少于1/2的患者相同表现CRP升高。在病毒感染病例中，SAA和CRP浓度升高见于腺病毒感染者。SAA和CRP的反应形式在急性感染的恢复阶段是平行的，这同时适用于细菌和病毒感染。因此在感染早期，SAA联合CRP检测，能提高鉴别细菌或病毒感染的可靠性。

为了对SAA进行检测，目前用于检测SAA的方法主要有免疫比浊法和酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。但是，免疫比浊法有灵敏度低、高浓度样本易发生钩状效应（HOOK效应）、检测结果易受血脂浓度的影响，若血脂含量过高，可致待测样品含量假性升高、同时少量小抗原抗体复合物极难形成浊度，可致假阴性等缺陷；酶联免疫吸附法则操作步骤繁琐、反应时间较长。

鉴于此，有必要提供一种用于血清淀粉样蛋白A检测的磁微粒化学发光免疫试剂盒及其制备方法和应用，以解决或至少缓解上述准确度和灵敏度低、易发生钩状效应、检测结果易受干扰、操作繁琐等技术缺陷。

发明内容

本发明的主要目的是提供了，旨在解决上述准确度和灵敏度低、易发生钩状效应、检测结果易受干扰、操作繁琐的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于SAA检测的磁微粒化学发光免疫试剂盒的制备方法，包括步骤：